新生大鼠缺氧缺血性腦損傷腦組織水通道蛋白-4的表達(dá)與神經(jīng)細(xì)胞凋亡.pdf

1、目的
　　 缺氧缺血性腦損傷(HIBD)的發(fā)病機(jī)制是復(fù)雜的,隨著對(duì)HIBD發(fā)病機(jī)制的進(jìn)一步認(rèn)識(shí),HIBD后遲發(fā)性神經(jīng)元死亡的發(fā)生與細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。由于凋亡進(jìn)展緩慢而且可逆,為治療HIBD提供了時(shí)間窗。腦組織水通道蛋白-4(Aquaporin-4,AQP-4)在圍產(chǎn)期新生兒窒息中的作用還不十分清楚,本研究亦在探討HIBD時(shí)AQP-4的表達(dá)及其與腦細(xì)胞凋亡的關(guān)系。
　　 方法
　　 新生7日齡Wistar大鼠30只

2、,隨機(jī)分為對(duì)照組(10只)和實(shí)驗(yàn)組(20只)。實(shí)驗(yàn)組根據(jù)處死時(shí)間不同又分為2個(gè)亞組:1d組、3d組,每亞組各10只。實(shí)驗(yàn)組新生大鼠采用結(jié)扎左側(cè)頸總動(dòng)脈后置于含8%濃度氧的低氧環(huán)境中2小時(shí)制備而成;對(duì)照組新生大鼠僅分離頸動(dòng)脈,未結(jié)扎及缺氧。兩組均于造模后1d、3d留取其腦組織,采用HE染色、電鏡、免疫組織化學(xué)檢測(cè)腦組織AQP-4表達(dá)及腦細(xì)胞凋亡情況。采用SPSS16.0軟件進(jìn)行分析。
　　 結(jié)果
　　 1、行為能力改變:缺

3、氧缺血后新生大鼠出現(xiàn)不同程度的行為異常,如自發(fā)左旋,逐漸失去平衡能力,部分鼠出現(xiàn)抽搐,尿、便失禁,嗜睡或昏睡狀態(tài),有的昏迷;
　　 2、HE染色和電鏡:二者結(jié)果均證實(shí),新生大鼠HIBD時(shí)凋亡是神經(jīng)細(xì)胞主要的死亡形式,與壞死共存,且凋亡的發(fā)生先于壞死;凋亡的細(xì)胞主要位于選擇性細(xì)咆死亡區(qū)、病變較輕的丘腦和海馬CA2/CA3區(qū)域、病變較重的皮質(zhì)和紋狀體邊緣內(nèi)帶;而壞死的細(xì)胞主要位于病變較重的皮質(zhì)和紋狀體的中心。HE染色顯示缺氧缺血組大

4、鼠大腦皮質(zhì)出現(xiàn)局灶性神經(jīng)元核固縮,核碎裂,核仁偏位或消失,膠質(zhì)細(xì)胞增生,基質(zhì)疏松;電鏡可更加清晰、細(xì)致的觀察細(xì)胞凋亡的改變,明確區(qū)別正常神經(jīng)細(xì)胞,早、中、晚期凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。
　　 3、免疫組織化學(xué)染色:缺氧缺血組新生大鼠腦組織AQP-4表達(dá)較對(duì)照組明顯增加,實(shí)驗(yàn)組腦細(xì)胞胞漿內(nèi)可見大量棕黃色顆粒沉著,而對(duì)照組僅在腦實(shí)質(zhì)血管周圍,星形膠質(zhì)細(xì)胞可見少量棕黃色顆粒,對(duì)照組腦組織的AQP-4的免疫組化平均OD值(0.23±0.05)

5、低于實(shí)驗(yàn)組(HIBD后1d0.25±0.03;HIBD后3d0.27±0.03),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論
　　 1、HE染色、免疫組化及透射電鏡均證實(shí)新生大鼠HIBD時(shí)凋亡是神經(jīng)細(xì)胞主要的死亡形式、與壞死共存,凋亡先于壞死。凋亡的細(xì)胞主要位于選擇性細(xì)胞死亡區(qū)、病變較輕的丘腦和海馬CA2/CA3區(qū)域、病變較重的皮質(zhì)和紋狀體邊緣內(nèi)帶;而壞死的細(xì)胞主要位于病變較重的皮質(zhì)和紋狀體的中心。遲發(fā)性的細(xì)胞凋亡是