P38 MAPK信號(hào)通路對(duì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、各種原因引起的表皮缺乏性疾病是臨床常見(jiàn)的治療比較棘手的病種。燒傷，創(chuàng)傷及各種腫瘤手術(shù)后的表皮缺失，眼表角膜緣干細(xì)胞缺乏相關(guān)的疾病，如酸堿化學(xué)燒傷、熱燒傷、先天性無(wú)虹膜、Stevens—Johnson綜合征、瘢痕類(lèi)天皰瘡等自身免疫性疾病，都會(huì)導(dǎo)致表皮的組織缺失。對(duì)于這些疾病目前人們還沒(méi)找到一種最令人滿意的治療方法。自體或者同種異體表皮移植因?yàn)槠渑懦饴实鸵呀?jīng)成為治療首選。然而治療依賴的體表重建又面臨供體組織移植后免疫排斥，供體來(lái)源短缺等問(wèn)題

2、。所以，體外培養(yǎng)的組織工程治療性研究成為許多學(xué)者關(guān)注的熱點(diǎn)。 干細(xì)胞是一種具有復(fù)制能力和多向分化潛能的細(xì)胞。在組織工程的細(xì)胞學(xué)基礎(chǔ)中，干細(xì)胞無(wú)疑是最好的體外擴(kuò)增“種子”細(xì)胞。但干細(xì)胞在體外培養(yǎng)條件下很容易分化而失去增殖功能，至今仍然沒(méi)有一個(gè)公認(rèn)的實(shí)際有效的組織工程化培養(yǎng)體系。 理想的體外培養(yǎng)體系要滿足兩個(gè)條件，一是要在體外保持干細(xì)胞的高增殖能力，以便擴(kuò)增更多的細(xì)胞用于移植。二是要能較長(zhǎng)時(shí)間保持干細(xì)胞的特性，為體外培養(yǎng)和移

3、植創(chuàng)造條件。P38MAPK信號(hào)通路是細(xì)胞內(nèi)的一類(lèi)穩(wěn)定蛋白，研究表明其參與多種干細(xì)胞的分化過(guò)程，SB203580是P38MAPK信號(hào)通路的特異性阻斷劑。 我們研究阻斷劑SB203580對(duì)結(jié)膜上皮干細(xì)胞和皮膚上皮干細(xì)胞體外擴(kuò)增的影響。發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)基中加入10μMSB203580阻斷劑后，體外組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)的結(jié)膜上皮片更光滑，細(xì)胞更緊密，邊緣整齊，以單層細(xì)胞為主。而對(duì)照組的結(jié)膜上皮片細(xì)胞疏松，組織塊邊緣不規(guī)則，以復(fù)層細(xì)胞為主。為觀察擴(kuò)增

4、細(xì)胞中的干細(xì)胞含量，我們對(duì)擴(kuò)增細(xì)胞進(jìn)行了克隆化培養(yǎng)。結(jié)果顯示阻斷組擴(kuò)增的表皮細(xì)胞能形成更多克隆集落，克隆生成率增加。證明擴(kuò)增的細(xì)胞中有更多的干細(xì)胞或前體細(xì)胞。阻斷組的組織塊生長(zhǎng)指標(biāo)更好。培養(yǎng)的組織塊加入阻斷劑后，組織塊中上皮干細(xì)胞標(biāo)志物ABCG2，P63，K15及高增殖標(biāo)志K16和K14表達(dá)增加。證明組織塊加入阻斷劑后，經(jīng)過(guò)體外培養(yǎng)上皮干細(xì)胞仍能保持較好的干細(xì)胞特性和高增殖水平。 在結(jié)膜上皮干細(xì)胞和皮膚上皮干細(xì)胞的體外克隆化培養(yǎng)

5、中，加入10μMSB203580阻斷劑后，干細(xì)胞的初次出現(xiàn)時(shí)間提前2天，克隆生成率是對(duì)照組的3倍。上皮克隆內(nèi)的細(xì)胞更小更緊密，核漿比增加；細(xì)胞倍增時(shí)間更短，更多細(xì)胞表達(dá)增殖標(biāo)志物Ki67；流式細(xì)胞學(xué)分析更多細(xì)胞位于S期。證明相比普通培養(yǎng)液，加入10μMSB203580后，其結(jié)膜上皮干細(xì)胞和皮膚上皮干細(xì)胞確實(shí)能保持更高的增殖能力。免疫組織化學(xué)染色顯示，阻斷組克隆內(nèi)的表皮細(xì)胞表達(dá)更多的干細(xì)胞標(biāo)志物如：P63、ABCG2、K15，Realti