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文檔簡介
1、目的:探討p38信號通路對體外培養(yǎng)的角膜緣干細(xì)胞和皮膚上皮干細(xì)胞增殖及分化的影響。
方法:小鼠角膜緣干細(xì)胞系TKE2用KSFM培養(yǎng)基培養(yǎng),人的皮膚上皮干細(xì)胞以3T3作滋養(yǎng)層用SHEM培養(yǎng)基體外培養(yǎng)。人角膜緣和皮膚組織用OCT包埋并冰凍切片后進(jìn)行免疫染色。通過慢病毒誘導(dǎo)的方法,活化或抑制TKE2細(xì)胞和人皮膚上皮干細(xì)胞中p38信號通路的活性,并通過免疫印跡分析、免疫熒光染色,結(jié)合結(jié)晶紫染色和MTT檢測等方法,檢測p38信號通路
2、的活性及干細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá)水平的變化。
結(jié)果:在正常人的皮膚及角膜組織中,p38信號通路在人皮膚和角膜緣上皮表層部位活性較強(qiáng)。干細(xì)胞標(biāo)記物p63、增值性指標(biāo)Ki67及增殖相關(guān)角蛋白K14、K16主要表達(dá)于皮膚及角膜緣上皮組織基底層,終末分化標(biāo)志蛋白K10和K12分別表達(dá)于皮膚和角膜上皮的表層細(xì)胞中。Notch信號通路的下游基因Hesl,在皮膚和角膜上皮的基底層表達(dá)較強(qiáng),表層細(xì)胞中表達(dá)減弱。抑制角膜緣和皮膚上皮干細(xì)胞中的p3
3、8信號通路,可顯著提高其克隆形成率和形成面積,且克隆細(xì)胞中p63、K14、K16表達(dá)量增加,同時(shí)Notch信號通路受體Notchl和下游基因Hesl表達(dá)量也有所增加。
結(jié)論:p38信號通路可影響角膜緣干細(xì)胞和皮膚上皮干細(xì)胞的增殖能力,導(dǎo)致其分化加速。對p38信號通路的抑制,可以更好的維持角膜緣干細(xì)胞和皮膚上皮干細(xì)胞在體外培養(yǎng)時(shí)的增殖能力。同時(shí),抑制p38信號通路的活性后,可以引起Notch信號通路的活性上調(diào),并共同作用于上
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