白靈菇液體發(fā)酵及其胞外多糖生物活性的研究.pdf

1、白靈菇是一種珍貴的食藥兩用真菌，其多糖具有抗腫瘤、抗衰老、改善免疫系統(tǒng)功能等功效。本文對白靈菇菌株的液體深層發(fā)酵工藝、菌絲體成分、胞外多糖提取方法、胞外多糖的分離純化、理化性質(zhì)以及生物活性進行了較系統(tǒng)的研究，為白靈菇發(fā)酵產(chǎn)品的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。 以獲取較高菌絲生物量為目的，通過正交試驗，確定白靈菇的最適液體發(fā)酵培養(yǎng)基的組成為：玉米粉3.0％、葡萄糖1.0％、酵母粉0.1％、黃豆粉2.0％、KH2PO40.3％、MgSO4·7H2O0

2、.1％、CaSO40.1％。 在搖瓶培養(yǎng)條件試驗中研究pH值、裝液量、接種量、搖床轉(zhuǎn)速等因素對生物量的影響。結(jié)果表明最佳的搖瓶培養(yǎng)條件為：起始pH值6.5、裝液量80ml/250ml、接種量10％、搖床轉(zhuǎn)速160rpm，發(fā)酵周期為6d。 在搖瓶培養(yǎng)試驗的基礎(chǔ)上，進行發(fā)酵罐發(fā)酵試驗，結(jié)果表明：利用5L發(fā)酵罐，在通氣量(v/v)為1∶0.5、攪拌速度為100r/min、裝液量為3L，溫度25±1℃條件下，菌絲生物量達到2.9

3、g/100ml。 對白靈菇液體發(fā)酵的菌絲體與子實體成分分析，結(jié)果表明：發(fā)酵菌絲體和子實體的甲醇提取物，經(jīng)紫外掃描所得的峰形大致相同，均在210nm和260nm處有較強的吸收峰，兩者在成分上相似。發(fā)酵菌絲體在氨基酸組成上與子實體一致，且菌絲體氨基酸總量、必需氨基酸總量均明顯高于子實體。 胞外多糖提取的最佳工藝路線為：將離心除去菌絲體的發(fā)酵液pH調(diào)至6.0，60℃下濃縮至原體積的1/2，冷卻后加入預(yù)冷的95％乙醇至終濃度75

4、％，4℃冰箱靜置至少24h。5000rpm離心收集沉淀，沉淀經(jīng)無水乙醇、丙酮反復(fù)洗滌，得粗多糖。用sevag試劑除去蛋白，低壓真空濃縮至小體積，透析除去小分子，真空冷凍干燥，得精制多糖。然后經(jīng)DEAE-DE52和SephadexG-100層析柱，得多糖純品，其多糖含量為90.5％，氣相色譜分析表明：多糖由D-半乳糖、D-葡萄糖、D-甘露糖、D-木糖、D-阿拉伯糖等組成，摩爾比為2.448∶1.466∶0.684∶0.700∶0.586。

5、分子量為2.79×105，紅外光譜測得其為β-型吡喃糖。 通過體內(nèi)和體外試驗對白靈菇胞外多糖生物活性進行研究，結(jié)果表明：胞外多糖具有較強的清除自由基能力，抑制·OH所致小鼠肝組織MDA生成和肝線粒體腫脹，在濃度為1mg/ml時就達到極顯著的水平(P＜0.01)；胞外多糖還具有提高小鼠血清、肝組織中SOD、GSA和CAT的活力和抑制MDA的生成能力，在較低濃度就能達極顯著的水平。結(jié)果表明白靈菇胞外多糖在體內(nèi)和體外都具有較強的生物活