缺血-藥物后處理通過激活Nrf2-ARE通路保護(hù)缺血心肌的線粒體功能.pdf

1、目的：
　　觀察缺血、乳化異氟醚和吡那地爾后處理對缺血再灌注大鼠離體心臟功能、線粒體結(jié)構(gòu)及呼吸功能的影響，并探討Nrf2-ARE通路在缺血、乳化異氟醚和吡那地爾后處理產(chǎn)生心肌保護(hù)作用的激活機(jī)制。
　　方法：
　　1.研究Nrf2-ARE通路在缺血、乳化異氟醚后處理心肌保護(hù)作用中的激活機(jī)制。
　　1.1分組
　　雄性SD大鼠96只，隨機(jī)分為8組，每組12只，分別為：正常組（N組）、缺血再灌注組（Con組）、缺

2、血后處理組（IPO組）、N-(2-巰基丙酰)-甘氨酸（MPG，2 mmol/L）+缺血后處理組（M+IPO組）、毛地黃酮（50μmol/L，L）+缺血后處理組（L+IPO組）、乳化異氟醚（1.68 mmol/L）后處理組(EI組)、MPG（2 mmol/L）+乳化異氟醚（1.68 mmol/L）后處理組(M+EI組)、L（50μmol/L）+乳化異氟醚（1.68 mmol/L）后處理組(L+EI組)。
　　1.2各組灌注方案：

3、r>　?。?）N組：K-H液灌注平衡20min，持續(xù)灌注100min。
　?。?）Con組：K-H液灌注平衡20min，ST.Thomas停跳液（4℃）停跳后缺血40min（32℃），再灌注60min。
　?。?）IPO組：再灌注開始即刻分別予10s的再灌注、10s缺血，6個循環(huán)后再灌注58min。
　?。?）EI組：再灌注開始即刻予EI處理2min，再灌注58min。后處理藥物均用K-H液稀釋。
　?。?）M+

4、IPO組和M+EI組，分別于再灌注即刻給予含MPG的K-H液灌注3 min，再IPO或EI處理2min，再灌注55min。
　?。?）L+IPO組和L+EI組，分別于再灌注即刻給予含L的K-H液灌注3 min，再IPO或EI處理2min，再灌注55min。
　　1.3觀察指標(biāo)
　?。?）記錄各組平衡末及再灌末的心率（HR）、左室發(fā)展壓（LVDP）、+dp/dtmax、以及左室舒張末壓（LVEDP）等心功能各指標(biāo)的變化。

5、
　?。?）取心室肌組織進(jìn)行線粒體提取，用氧電極分析各組線粒體的呼吸功能變化。
　?。?）電鏡下觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)的變化及線粒體Flameng評分情況。
　　2.研究Nrf2-ARE通路在缺血、吡那地爾后處理心肌保護(hù)作用中的激活機(jī)制。
　　2.1分組
　　SD雄性大鼠96只，隨機(jī)分為8組，每組12只，分別為：正常組（N組）、缺血再灌注組（Con組）、缺血后處理組（IPO組）、吡那地爾(50μmol/L)后

6、處理組（P組）、MPG（2 mmol/L）+缺血后處理組（M+IPO組）、MPG（2 mmol/L）+吡那地爾(50μmol/L)后處理組（M+P組）、L（50μmol/L）+缺血后處理組（L+IPO組）、L（50μmol/L）+吡那地爾(50μmol/L)后處理組（M+P組）。
　　2.2各組灌注方案：
　?。?）正常組（N組）：K-H液灌注平衡20min后續(xù)灌100min。
　?。?）缺血再灌注組（Con組）：K-

7、H液灌注平衡20min，4℃ ST.Thomas停跳液停跳后并32℃缺血40min，再灌注60min。
　?。?）缺血后處理組（IPO組）：于再灌注開始即刻進(jìn)行10s的再灌注和10s的缺血，共6個循環(huán)后再灌注58min。
　?。?）吡那地爾后處理組（P組）：于再灌注開始即刻給予P處理2min，再灌58min。后處理藥物均用K-H液稀釋。
　　（5）M+IPO組和M+吡那地爾（P組）后處理組，分別于再灌注即刻予含MPG的

8、K-H液灌注3 min，再IPO或吡那地爾處理2min，再灌55min。
　?。?）L+IPO組和L+吡那地爾（P組）后處理組，分別于再灌注即刻予含 L的K-H液灌注3 min，再IPO或吡那地爾處理2min，再灌55min。
　　2.3觀察指標(biāo)
　　（1）記錄各組平衡末及再灌末的左室發(fā)展壓（LVDP）、心率（HR）、左室舒張末壓（LVEDP）、以及+dp/dtmax等心功能各指標(biāo)的變化。
　　（2）取心室肌組織

9、，提取線粒體，氧電極分析各組線粒體呼吸功能。
　　（3）電鏡下觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)變化、線粒體Flameng評分情況。
　　結(jié)果：
　　1.缺血、乳化異氟醚后處理組檢測結(jié)果
　　1.1心臟整體功能：平衡末各組心功能指標(biāo)均無明顯差異。再灌注末 HR和+dp/dtmax及LVDP：與N組比較，其余各組均下降（P<0.05）；與Con組比較，IPO組、EI組均顯著升高（P<0.05）；與IPO組比較，M+IPO、L+I

10、PO組較之明顯下降（P<0.05），而EI組無明顯差異；和EI組比較，M+EI、L+EI組明顯下降（P<0.05）。再灌注末LVEDP：與N組比較，其余各組均升高（P<0.05），Con組升高明顯（P<0.05）；與Con組比較，各組均降低，其中IPO組、EI組降低較為顯著（P<0.05）；與IPO組比較，EI組變化不大，M+IPO、L+IPO組顯著升高（P<0.05）；與EI組比較，M+EI、L+EI組明顯升高（P<0.05）。

11、>　　1.2線粒體呼吸功能：再灌注末3態(tài)呼吸和呼吸控制率：與N組比較，其余各組均下降（P<0.05）；與Con組比較，IPO組、EI組均顯著升高（P<0.05）；與IPO組比較，M+IPO、L+IPO組較之明顯下降（P<0.05），而EI組無明顯差異；和EI組比較，M+EI、L+EI組明顯下降（P<0.05）。
　　1.3電鏡下觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)變化和線粒體Flameng評分。
　　1.3.1心肌組織超微結(jié)構(gòu)：N組結(jié)構(gòu)形態(tài)

12、基本正常；Con組結(jié)構(gòu)損傷最嚴(yán)重；IPO組、EI組優(yōu)于Con組，M+IPO、L+IPO組較IPO組損傷嚴(yán)重，M+EI、L+EI組較EI組損傷嚴(yán)重。
　　1.3.2線粒體Flameng評分：與N組比較，其余各組分?jǐn)?shù)均顯著升高（P<0.05），IPO組、EI組評分明顯低于Con組和對應(yīng)應(yīng)用MPG及L組（P<0.05），IPO組、EI組評分無明顯差異。
　　2.缺血、吡那地爾后處理組檢測結(jié)果
　　2.1.心臟整體功能：平衡末

13、各組心功能指標(biāo)均無明顯差異。再灌注末 HR和+dp/dtmax及LVDP：與N組比較，其余各組均下降（P<0.05）；與Con組比較，IPO組和P組均顯著升高（P<0.05）；與IPO組比較，M+IPO、L+IPO組較之明顯下降（P<0.05），而P組無明顯差異；與P組比較，M+P、L+P組顯著降低（P<0.05）。再灌注末LVEDP：與N組比較，其余各組均升高（P<0.05），其中Con組升高明顯；與Con組比較，各組均降低，其中IP

14、O組、P組降低較為顯著（P<0.05）；與IPO組比較，P組變化不大，M+IPO、L+IPO組顯著升高（P<0.05）；與P組比較，M+P、L+P組顯著升高（P<0.05）。
　　2.2線粒體呼吸功能：再灌注末3態(tài)呼吸和呼吸控制率：與N組比較，其余各組均下降（P<0.05）；與Con組比較，IPO組、P組均顯著升高（P<0.05）；與IPO組比較，M+IPO、L+IPO組較之明顯下降（P<0.05），而P組無明顯差異；和P組比較，

15、M+P、L+P組明顯下降（P<0.05）。
　　2.3電鏡下觀察心肌組織超微結(jié)構(gòu)變化和線粒體Flameng評分。
　　2.3.1心肌組織超微結(jié)構(gòu)：N組結(jié)構(gòu)形態(tài)基本正常；Con組結(jié)構(gòu)損傷最嚴(yán)重；IPO組、P組優(yōu)于Con組，M+IPO、L+IPO組較IPO組損傷嚴(yán)重，M+P、L+P組較P組損傷嚴(yán)重。
　　2.3.2線粒體Flameng評分：與N組比較，其余各組分?jǐn)?shù)均顯著升高（P<0.05），IPO組、P組評分明顯低于Con