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文檔簡(jiǎn)介
1、在肝組織存在纖維化甚至肝硬化的病理改變基礎(chǔ)上,各種致病因子的打擊更容易造成嚴(yán)重的肝功能衰竭。終末期肝功能衰竭,臨床治療效果差,給人民健康及醫(yī)療財(cái)政帶來了嚴(yán)峻的考驗(yàn)。眾多研究表明肝纖維化形成機(jī)制復(fù)雜,但具有可逆性。近年來研究發(fā)現(xiàn)MicroRNA在調(diào)控肝纖維化形成過程中發(fā)揮著重要的作用,有研究表明促肝纖維化發(fā)展的MicroRNA,其抑制劑能有效的逆轉(zhuǎn)肝纖維化。因此有關(guān)肝纖維化的MicroRNA研究可能為臨床治療肝纖維化帶來新的突破。
2、 第一部分:構(gòu)建大鼠免疫性肝纖維化模型
目的:明確是否成功構(gòu)建大鼠免疫性肝纖維化模型。
方法:將26只雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為兩組(A、B),A組10只,B組16只。A組為正常對(duì)照組,生理鹽水腹腔注射(0.5ml/只,2次/周)連續(xù)12周;B組為肝纖維化模型組,其中隨機(jī)選取3只為B1組,腹腔注射豬血清0.5ml/只/次,2次/周,共4周;繼續(xù)隨機(jī)抽選3只為B2組,腹腔注射豬血清0.5ml/只/次,2次/周,共8
3、周;余下10只為B3組,腹腔注射豬血清0.5ml/只/次,2次/周,共12周。B1、B2組實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分別在第4周末及第8周末處死,留取肝組織進(jìn)行HE染色、Masson染色,余下全部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物在第12周末次給藥次日處死,留取肝組織進(jìn)行HE及Masson染色,依據(jù)肝纖維化病理分期方案對(duì)大鼠肝纖維化程度進(jìn)行評(píng)分,對(duì)膠原纖維面積實(shí)行半定量分析。
結(jié)果:1.HE及Masson染色圖示:肝纖維化模型B1組的肝組織形態(tài)學(xué)改變不明顯;B2組肝細(xì)胞
4、存在腫脹變性,肝索結(jié)構(gòu)排列較紊亂,結(jié)締組織有增生,纖細(xì)的纖維間隔形成,但是未見假小葉;B3組肝小葉結(jié)構(gòu)紊亂,肝索排列不規(guī)則,肝竇扭曲,結(jié)締組織明顯增生,纖維間隔形成;2.肝纖維化模型B3組肝纖維化程度及膠原纖維面積較正常A組明顯增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
結(jié)論:通過連續(xù)12周向Wistar大鼠腹腔注射豬血清可成功構(gòu)建大鼠免疫性肝纖維化模型。
第二部分:分析大鼠肝纖維化組織與正常肝組織中MicroRNA
5、的表達(dá)差異
目的:探索大鼠肝纖維化組織與正常肝組織中MicroRNA的表達(dá)差異。
方法:在A組與B3組中分別選取3份肝組織標(biāo)本,用trizol保存送至深圳華大基因進(jìn)行RNA提取及MicroRNA高通量測(cè)序技術(shù)檢測(cè),然后分析其表達(dá)譜差異,再運(yùn)用qPCR技術(shù)進(jìn)行結(jié)果驗(yàn)證。
結(jié)果:與大鼠正常肝組織相比,在豬血清誘導(dǎo)的大鼠免疫性肝纖維化組織中總共有9種MicroRNA發(fā)生了變化,其中MicroRNA-1、Micro
6、RNA-30b-5p、 MicroRNA-144 MicroRNA-451、MicroRNA-674-3p表達(dá)下調(diào),而MicroRNA-27a、 MicroRNA-138、MicroRNA-146b、 MicroRNA-342-5p則表達(dá)上調(diào)。
結(jié)論:在豬血清誘導(dǎo)的大鼠免疫性肝纖維化組織中MicroRNA的表達(dá)譜較正常大鼠肝組織發(fā)生了變化,這些具有顯著差異的MicroRNA可能與肝纖維化的發(fā)生相關(guān)。
第三部分:研究M
7、icroRNA-138與肝纖維化細(xì)胞因子表達(dá)的相關(guān)性
目的:驗(yàn)證MicroRNA-138與肝纖維化的發(fā)生存在相關(guān)。
方法:運(yùn)用qPCR技術(shù)檢測(cè)A組及B3組(各10只,共20只)全部大鼠肝組織中MicroRNA-138的水平,并同時(shí)檢測(cè)TGF-β、COL-1、TIMP-1、CTGF的表達(dá)。最后運(yùn)用spss軟件統(tǒng)計(jì)分析MicroRNA-138水平與TGF-β、COL-1、TIMP-1、CTGF表達(dá)的相關(guān)性。
結(jié)
8、果:1.qPCR技術(shù)檢測(cè)顯示MicroRNA-138、TGF-β、COL-1、TIMP-1、CTGF在大鼠肝纖維化組織中的表達(dá)水平明顯高于正常肝組織,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);2.統(tǒng)計(jì)學(xué)分析MicroRNA-138與TGF-β、COL-1、TIMP-1及CTGF的相關(guān)系數(shù)分別為0.818、0.913、0.87和0.82,顯著性均為p=0.000<0.01,均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
結(jié)論:MicroRNA-138與豬血清誘導(dǎo)大
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