大鼠腹膜纖維化相關(guān)miRNA的初步篩選與驗證.pdf

1、目的:初步探索microRNA(miR)是否參與腹膜透析相關(guān)腹膜纖維化。方法:將SD雄性大鼠24只(體重150±10g)隨機平均分為3組:(i)正常對照組;(ii)生理鹽水組:每日腹腔注射0.9％生理鹽水20ml;(iii)高糖組:每日腹腔內(nèi)注射4.25％含葡萄糖腹膜透析液20ml。4周后，進行2h腹膜平衡試驗(PET)，檢測大鼠腹膜功能，處死大鼠，取大鼠腹膜組織，行光鏡檢查（HE、Masson染色），免疫組化（SP法）檢測α平滑肌肌動

2、蛋白(α-SMA)和膠原Ⅰ(Col-Ⅰ)的蛋白表達，RT-qPCR檢測α-SMA和Col-Ⅰ的mRNA表達，基因芯片分析檢測各組miRNA。選取芯片分析顯著差異表達的miRNA，進行RT-qPCR驗證。
　　 結(jié)果:與空白對照組比較或與生理鹽水組比較，高糖組大鼠的透出液葡萄糖濃度/初始腹透液葡萄糖濃度（D2/D0）和超濾量均明顯減少，透出液尿素氮濃度/血漿尿素氮濃度(D/Purea)明顯增加。生理鹽水組與空白對照組的組間比較，D

3、2/D0、超濾量及D/Purea的差異均無統(tǒng)計學意義。
　　 高糖組大鼠腹膜間皮下基質(zhì)增厚、血管增生及炎癥細胞浸潤明顯增加。與空白對照組比較或與生理鹽水組比較，高糖組大鼠腹膜組織α-SMA和Col-Ⅰ的蛋白及mRNA的表達量均顯著升高。生理鹽水組與空白對照組的組間比較，大鼠腹膜組織α-SMA和Col-Ⅰ的蛋白及mRNA的表達量均無顯著差異。基因芯片分析提示:(1)與空白對照組比較或與生理鹽水組比較，miR-31、miR-93、m

4、iR-100、miR-152和miR-497在高糖組大鼠腹膜組織中均呈顯著性低表達，miR-122在高糖組大鼠腹膜組織中呈顯著性高表達;(2)與空白對照組比較， miR-192、miR-194、miR-200b、miR-138和miR-146a等miRNAs也在高糖組大鼠腹膜組織中均呈顯著性低表達;(3)與生理鹽水組比較， miR-199a-5p、miR-200c、miR-24-2、miR-27b、miR-30b-5p等miRNAs也在

5、高糖組大鼠腹膜組織中均呈顯著性低表達;(4)與空白對照組比較，miR-192、miR-194和miR-200b在生理鹽水組大鼠腹膜組織中也呈顯著性低表達。
　　 選取芯片分析顯著差異表達的9條miRNAs(miR-31、miR-93、miR-100、miR-152、miR-497、miR-122、miR-192、miR-194和miR-200b)，進行RT-qPCR驗證。結(jié)果顯示:與空白對照組比較或與生理鹽水組比較，miR-31

6、、miR-93、miR-100、miR-152、miR-497、miR-192、miR-194和miR-200b等8條miRNAs在高糖組大鼠腹膜組織中的表達均呈顯著性低表達，miR-122在高糖組大鼠腹膜組織中呈顯著性高表達;生理鹽水組與空白對照組的組間比較，上述9條miRNAs在大鼠腹膜組織中的表達均無顯著差異。
　　 結(jié)論:
　　 (1)4.25％葡萄糖腹膜透析液，連續(xù)腹腔注射28天，可以建立大鼠PF模型。