米非司酮聯(lián)合紫杉醇對人宮頸癌細(xì)胞的作用及其機理的研究.pdf

1、目的:研究米非司酮(Mifepristone,MIF)、紫杉醇(TAX)及兩者合用在體外對人宮頸腺癌 Hela細(xì)胞和人宮頸鱗癌 SiHa細(xì)胞增殖影響,并探討其作用機制,以期發(fā)現(xiàn)一種通過誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡來抑制宮頸癌細(xì)胞生長的新的聯(lián)合用藥,為擴大米非司酮化療增敏的用藥奠定科學(xué)的理論基礎(chǔ)。
　　方法:取對數(shù)生長期的人宮頸癌Hela細(xì)胞、SiHa細(xì)胞,以單藥及聯(lián)合用藥處理后,采用四甲基偶氮唑藍(lán)(MTT)比色法測定細(xì)胞增殖活性;流式細(xì)胞儀(fl

2、ow cytometry, FCM)分析藥物對人宮頸癌Hela細(xì)胞、SiHa細(xì)胞的周期影響;RT-PCR法檢測用藥處理后對人宮頸癌Hela細(xì)胞、SiHa細(xì)胞中HPV E6、VEGF、COX-2 mRNA表達(dá)的變化;免疫印跡(Western blot)方法檢測用藥處理前后人宮頸癌Hela細(xì)胞、SiHa細(xì)胞的HPV E6、VEGF、COX-2蛋白表達(dá)的變化。
　　結(jié)果:1)MTT法結(jié)果顯示,發(fā)現(xiàn)不同濃度紫杉醇對 HeLa細(xì)胞、SiHa

3、細(xì)胞增殖均有抑制作用(P<0.01),具有量效和時效依賴性;MIF單藥結(jié)果顯示24h,48h對HeLa細(xì)胞溶媒組、MIF組(2.5、5μg/mL)與空白對照組比較,對 HeLa細(xì)胞增殖抑制率影響無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),當(dāng) MIF濃度大于10μg/mL時對 HeLa細(xì)胞增殖抑制率影響有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),具有量效和時效依賴性;不同濃度 MIF對 SiHa細(xì)胞具有明顯的增殖抑制作用(P<0.05);MIF聯(lián)合紫杉醇可增強其對

4、HeLa細(xì)胞、SiHa細(xì)胞的增殖抑制作用(P<0.01);2)流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示,單用及聯(lián)合用藥使 HeLa細(xì)胞、SiHa細(xì)胞 G0/G1期所占比例增加,S期比例減少,使周期主要阻滯在 G0/G1期,從而顯著抑制HeLa細(xì)胞、SiHa細(xì)胞的增殖;3)RT-PCR結(jié)果顯示,單用及聯(lián)合用藥處理HeLa細(xì)胞、SiHa細(xì)胞后使 HPV-E6、VEGF、COX-2 mRNA的表達(dá)水平下降;4) Western blot檢測顯示,單用及聯(lián)合應(yīng)用均能