甲魚油的提取與分析及其生物學活性研究.pdf

1、目的：為從甲魚脂肪中提取甲魚油，富集其中的ω-3 PUFAs，并分別從細胞水平和實驗動物整體水平探討其生物活性，即分別研究ω-3 PUFAs對胰島素抵抗HepG<,2>細胞胰島素敏感性及糖代謝和大鼠淺Ⅱ度燒傷創(chuàng)面愈合的影響。 方法：實驗一：采用超臨界CO<,2>萃取方法從甲魚脂肪中提取甲魚油，然后利用低溫濃縮法富集甲魚油中的ω-3 PUFAs，最后利用GC法測定甲魚油中的ω-3 PUFAs的含量。實驗二：利用高濃度胰島素體外誘導

2、方法建立HepG<,2>胰島素抵抗細胞模型，通過<'3>H-D-葡萄糖參入實驗鑒定該細胞模型。采用MTT方法檢測細胞的增殖情況。利用甲魚油處理模型細胞通過葡萄糖氧化酶及<'3>H-D-葡萄糖參入實驗分別檢測其葡萄糖消耗和<'3>H-D-葡萄糖參入率。實驗三：將甲魚油作用于正常大鼠皮膚表面，進行皮膚刺激試驗和致敏試驗。利用瓊脂擴散法，通過測定金葡菌、綠膿桿菌、大腸桿菌及白色念球菌等四組的抑菌圈，判斷甲魚油對致病菌的體外抑菌效果。同時用稀釋

3、法測定甲魚油的最低抑菌濃度MIC與最低殺菌濃度MBC。將甲魚油應用于大鼠淺Ⅱ度燒傷創(chuàng)面，判斷其對創(chuàng)面愈合及組織修復的影響。取108只Wistar大鼠隨機分為單純燒傷組、銀辛霜治療組和甲魚油治療組，每組36只。建立淺Ⅱ度燙傷大鼠模型，各組創(chuàng)面分別用銀辛霜紗布、甲魚油紗布，生理鹽水紗布覆蓋包扎固定。各組動物分別于傷后1，3，5，10，14天取創(chuàng)面組織，根據(jù)蘇木精-伊紅染色(HE)結果，病理組織學變化及通過免疫組織化學鏈霉素-卵白素-生物素-

4、過氧化物酶復合物法檢測的創(chuàng)面組織增殖細胞核抗原表達情況判斷創(chuàng)面愈合率及愈合時間。 結果：1.從經低溫干燥脫水處理的甲魚脂肪中提取甲魚油，得油率82.0％。經優(yōu)化的萃取實驗參數(shù)為：萃取壓力20MPA，分離壓力BMPA，萃取溫度50℃，分離溫度為35℃，CO<,2>流量為2ml/g。低溫濃縮法富集甲魚油中的ω-3 PUFAs的最佳條件為溫度-50℃、原料：溶劑比為1：12、冷凍時間8h，獲得的ω-3PUFAs含量最高(26.39％)

5、。2．高濃度胰島素細胞的葡萄糖參入率在各種濃度的胰島素刺激下均低于對照細胞(P<0.05)，并且高胰島素細胞與對照細胞的<'3>H-D-葡萄糖參入率隨著胰島素濃度的升高而升高，但前者升高的幅度低于后者。MTT結果顯示甲魚油均具有促進對照細胞和IR模型細胞增殖作用。與對照組細胞相比，采用不同濃度胰島素誘導的模型細胞經甲魚油處理后其葡萄糖攝取和消耗顯著增加(P<0.05)。3．皮膚刺激試驗和致敏試驗結果顯示，大鼠皮膚經ω-3 PUFAs處理

6、后無充血、水腫及潰瘍等皮膚刺激現(xiàn)象，大鼠未見噴嚏、用爪搔鼻、呼吸困難、休克死亡等全身過敏反應，亦未見局部水腫、蕁麻疹等反應。甲魚油的體外抑菌實驗結果顯示，甲魚油抑制金葡菌的最低濃度1：16，抑制大腸桿菌與白色念珠菌的最低濃度均為1：4，而對金葡萄的最低殺菌濃度為1：2，對大腸桿菌、白色念珠菌的最低殺菌濃度為1：1，但對綠膿桿菌沒有抑菌和殺菌作用。甲魚油對大鼠淺Ⅱ度燒傷創(chuàng)面組織愈合及修復的結果顯示：(1)創(chuàng)面愈合時間：甲魚油治療組比單純燒

7、傷組、銀辛霜治療組明顯縮短。(2)創(chuàng)面愈合率：甲魚油治療組、銀辛霜治療組比單純燒傷組明顯升高。(3)病理切片顯示甲魚油能減輕燒傷創(chuàng)面早期的炎癥反應，組織學分析顯示甲魚油可促進創(chuàng)面的再上皮化和表皮各層的分化。(4)增殖細胞核抗原在創(chuàng)面組織標本中的表達量：甲魚油治療組比單純燒傷組和銀辛霜治療組明顯升高。 結論：1．采用超臨界CO2萃取和低溫結晶方法可以從甲魚脂肪中提取出富含ω-3 PUFAs的甲魚油，并可通過氣相色譜方法檢測其含量。

8、2．HepG<,2>細胞置于5×10<'-7>mol·L<'-1>胰島素環(huán)境中16 h，HepG<,2>的HepG<,2>胰島素抵抗細胞模型。甲魚油明顯增加該IR細胞模型的葡萄糖消耗和<'1>H-D-葡萄糖參入率，提高胰島素抵抗細胞模型的胰島素敏感性，改善其糖代謝。3．甲魚油對大鼠正常皮膚不具有皮膚刺激和致敏作用，對金葡菌、大腸桿菌及白色念珠菌具有抑菌作用，而對綠膿桿菌不具有抑制作用。甲魚油能加速大鼠燒傷創(chuàng)面組織修復細胞的增殖，加快創(chuàng)面