大鼠腦損傷后apo E和β-APP時(shí)序性表達(dá)的研究.pdf

1、載脂蛋白E(apolipoproteinE,apoE)和p淀粉樣前體蛋白(beta-amyloidprecursorprotein，β-APP)在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育、功能的穩(wěn)定及損傷后修復(fù)中都起到重要的作用。目前國(guó)內(nèi)外對(duì)此報(bào)道相對(duì)較少，且尚未見自由落體撞擊致腦損傷后apoE和β-APP表達(dá)規(guī)律的研究報(bào)道。為了進(jìn)一步闡明其在創(chuàng)傷性腦損傷中的作用和地位，探討在早期腦損傷時(shí)間推斷的應(yīng)用價(jià)值，本課題對(duì)大鼠中度腦挫傷模型進(jìn)行更深入地研究。 本

2、課題選用健康成年雄性SD大鼠，采用改進(jìn)的Edward自由落體撞擊儀復(fù)制中度腦挫傷模型，通過(guò)常規(guī)蘇木素-伊紅染色技術(shù)(hematoxylinandeosin，HE)對(duì)大鼠中度腦挫傷后14d內(nèi)繼發(fā)性腦損傷的病理學(xué)改變、apoE和β-APP的時(shí)序及空間分布特征進(jìn)行光鏡觀察，同時(shí)運(yùn)用免疫組織化學(xué)鏈霉素抗生物素蛋白過(guò)氧化酶連接法(StreptavidinPeroxidaseConjunctionMethod，SP)，并結(jié)合計(jì)算機(jī)圖象分析技術(shù)，對(duì)a

3、poE和β-APP表達(dá)變化的規(guī)律與腦損傷時(shí)間的關(guān)系進(jìn)行定量分析。 實(shí)驗(yàn)組用自由落體撞擊法形成大腦右頂葉中度腦挫傷后，按不同的預(yù)定時(shí)間段(0.5h、2h、6h、12h、24h、3d、7d和14d，)分批處死動(dòng)物(每個(gè)時(shí)間段取大鼠5只)并立即取出全腦置于4％多聚甲醛溶液(4℃)中固定；假性損傷組經(jīng)0.4％戊巴比妥鈉(用量為：1ml/kg)麻醉后僅行開顱手術(shù)而不行落體撞擊，并于術(shù)后3d處死、取腦；死后損傷組于處死后1h行落體撞擊。各組

4、標(biāo)本均在腦挫傷灶中心旁開2mm處，冠狀切取挫傷灶前、后端的腦組織。標(biāo)本經(jīng)取材制片后作apoE和β-APP免疫組化染色觀察，同時(shí)行HE染色對(duì)照。利用計(jì)算機(jī)圖象分析技術(shù)，定量測(cè)定免疫組化染色切片的陽(yáng)性細(xì)胞平均光密度、陽(yáng)性細(xì)胞百分比及陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)。所得數(shù)據(jù)用SAS8.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件包進(jìn)行分析。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：(1)腦損傷后0.5h組，腦皮質(zhì)神經(jīng)元apoE出現(xiàn)陽(yáng)性表達(dá)，3d達(dá)到高峰，隨后下降；腦損傷后0.5h組，在海馬區(qū)出現(xiàn)apoE強(qiáng)陽(yáng)性反

5、應(yīng)；CA1區(qū)在傷后3d達(dá)到高峰，而CA2～CA4區(qū)在24h達(dá)到高峰，隨后逐漸下降；海馬區(qū)apoE免疫染色強(qiáng)度依次為：CA3＞CA4＞CA2＞CA1。(2)皮質(zhì)內(nèi)β-APP在腦損傷后表達(dá)呈一定波動(dòng)性，0.5h表達(dá)明顯增加后，逐漸下降，12h降至最低，低于對(duì)照組，隨后再次出現(xiàn)表達(dá)增加，3d達(dá)高峰；海馬CA1區(qū)在腦損傷后24hβ-APP表達(dá)開始逐漸下降，3d降至最低，而CA2～CA4區(qū)僅在3d組較對(duì)照組顯著降低，14d均回到對(duì)照組水平；齒狀回

6、(DG)內(nèi)β-APP在腦損傷后12h低于對(duì)照組。 本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：傷后0.5h即出現(xiàn)表達(dá)，因此apoE蛋白可作為腦損傷早期診斷一個(gè)新的敏感指標(biāo)；對(duì)照組皮質(zhì)神經(jīng)元和海馬無(wú)apoE表達(dá)，而傷后才出現(xiàn)表達(dá)，也可為法醫(yī)學(xué)上鑒別生前和死后腦損傷提供依據(jù)。皮質(zhì)β-APP及apoE蛋白表達(dá)存在一定時(shí)續(xù)規(guī)律性，可望作為法醫(yī)學(xué)上推斷腦損傷時(shí)間的客觀指標(biāo)之一。腦損傷后海馬內(nèi)β-APP表達(dá)較皮質(zhì)挫傷灶周圍變化不明顯，因此在法醫(yī)腦損傷時(shí)間推斷上的應(yīng)用意