三七總皂苷對(duì)豚鼠膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎軟骨下NF-κB及TNF-α表達(dá)的影響.pdf

1、目的：通過(guò)觀察三七總皂苷(Panax notoginseng saponins，PNS)對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎(Osteoarthritis，OA)豚鼠關(guān)節(jié)軟骨病理改變以及軟骨下骨核轉(zhuǎn)錄因子NF-κBp65(Nucl-ear transcription factor-Kappa Bp65，NF-kBp65)、腫瘤壞死因子-α(Tumornecrosis factor-α，TNF-α)蛋白表達(dá)的影響，并與氨基葡萄糖組進(jìn)行比較，通過(guò)觀察PNS對(duì)豚鼠O

2、A模型干預(yù)結(jié)果，來(lái)探討PNS防治OA的作用機(jī)理。期望為臨床應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法：將32只3月齡健康狀態(tài)良好的雌性Hartly豚鼠隨機(jī)分為4大組，分別為模型組（M組）16只、氨基葡萄糖組（A組）8只、三七總皂苷組（Q組）8只，另選8只1月齡健康的雌性Hartly豚鼠作為正常組（Z組）。正常組直接處死采集膝關(guān)節(jié)軟骨組織標(biāo)本;模型組隨機(jī)取8只直接處死采集膝關(guān)節(jié)軟骨組織，剩余8只模型組豚鼠給予每日去離子水灌胃兩月后處死采集關(guān)節(jié)軟骨

3、組織。A組給予每日氨基葡萄糖灌胃，灌胃兩月后處死采集膝關(guān)節(jié)軟骨標(biāo)本;Q組給予每日血塞通片灌胃，灌胃兩月后采集膝關(guān)節(jié)軟骨標(biāo)本;采集軟骨標(biāo)本后觀察并記錄軟骨表面大體肉眼觀，然后立刻固定于4％的多聚甲醛溶液中不少于24小時(shí)，然后將其置于脫鈣液中，室溫下持續(xù)脫鈣30天。脫鈣完成后進(jìn)行梯度酒精脫水，石蠟包埋，常規(guī)切片(厚度4um)，一部分行番紅0-固綠染色，顯微鏡下觀察軟骨形態(tài)并采用Mankins評(píng)分，另一部分切片用于TNF-α和NF-kBp65

4、免疫組化分析。
　　結(jié)果：1.不同月齡豚鼠膝關(guān)節(jié)軟骨表面大體觀.Z組豚鼠膝關(guān)節(jié)軟骨面完整、光滑有光澤，關(guān)節(jié)面軟骨呈淡藍(lán)色。M3組膝關(guān)節(jié)外觀正常，關(guān)節(jié)面完整，部分區(qū)域光澤度欠佳，關(guān)節(jié)輕微發(fā)黃未見裂紋。M5組關(guān)節(jié)面整體缺乏光澤，關(guān)節(jié)面可見輕微粗糙，關(guān)節(jié)液變暗且稠。Q組膝關(guān)節(jié)關(guān)澤度欠佳，關(guān)節(jié)面完整，部分區(qū)域光澤度欠佳，關(guān)節(jié)軟骨輕微發(fā)黃。A組在關(guān)節(jié)面、關(guān)節(jié)液的表現(xiàn)上均優(yōu)于相同月份模型組。2.關(guān)節(jié)軟骨番紅O-固綠染色及Manking's評(píng)分

5、.Z組軟骨外觀完整，軟骨細(xì)胞分布均勻，軟骨基質(zhì)染色勻稱，軟骨細(xì)胞形狀無(wú)改變，潮線清晰連續(xù)。M3組軟骨表面可見微弱缺損，基本完整，軟骨細(xì)胞分布不均，可見部分基質(zhì)染色丟失，潮線模糊但連續(xù);M5組軟骨表面可見細(xì)小缺損，軟骨細(xì)胞排列混亂且數(shù)量不多軟骨基質(zhì)染色明顯不一致，潮線不連續(xù);三七總皂苷組軟骨表面基本完整，軟骨細(xì)胞較少排列不均，軟骨基質(zhì)顏色深淺不均，潮線模糊連續(xù);氨基葡萄糖組軟骨表面可見微小缺損，軟骨細(xì)胞排列不均，軟骨基質(zhì)染色較同月齡模型組

6、好。3.三七總皂苷對(duì)骨性關(guān)節(jié)炎模型豚鼠關(guān)節(jié)軟骨TNF-α和NF-kBp65表達(dá)的變化，模型組隨著豚鼠月齡增加，豚鼠軟骨下TNF-α和NF-kBp65的表達(dá)明顯增高，均有顯著差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。A組與M5組中TNF-α表達(dá)相比較有明顯差異(P＜0.01);Q組與M5組中TNF-α表達(dá)相比較有明顯差異(P＜0.01);A組與M5組中NF-kBp65的表達(dá)有明顯差異(P＜0.01);Q組與M5組中NF-kBp65的表達(dá)有明顯