復(fù)合骨形態(tài)發(fā)生蛋白2的不飽和聚磷酸酯成骨材料的合成及體外性能檢測.pdf

1、第一部分：
　　目的：合成一種新型的可用于組織工程骨的磁性PLGA-BMP2緩釋微球并對其各項性能進(jìn)行檢測分析。
　　方法：用復(fù)乳法合成磁性PLGA-BMP2微球;用掃描電鏡觀測微球微觀形態(tài);用振動樣品磁強計檢測微球磁性能;用ELISA法檢測微球載藥量、緩釋性能。
　　結(jié)果：掃描電鏡下可見微球呈正圓形,粒徑介于10-100um;振動樣品磁強計檢測結(jié)果顯示微球具有超順磁性;微球載藥量為1±0.18ng/mg;微球?qū)hB

2、MP2具有緩釋效果。
　　結(jié)論：合成的磁性PLGA-BMP2微球具有超順磁性和緩釋BMP2的能力,為新型磁性組織工程骨支架的研制奠定了基礎(chǔ)。
　　第二部分：
　　背景：我們前期的研究中合成了一種新型的不飽和聚磷酸酯(unsaturated polyphosphoester,UPPE)成骨材料。這種材料合成過程中的理化條件變化較大,可能會對加入其中的生物蛋白因子的活性產(chǎn)生不利影響。
　　目的：探討利用聚乳酸-羥基乙

3、酸共聚物(poly(lactic-co-glycolic acid),PLGA)微球,把骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(recombinant human bone morphogenetic protein-2,rhBMP2)加入到不飽和聚磷酸酯成骨材料中,并保持BMP2生物活性的可行性及效果。
　　方法：利用復(fù)乳法合成PLGA-BMP2微球。用掃描電鏡觀測微球微觀形態(tài);用激光共聚焦顯微鏡觀測微球上rhBMP2分布;用酶聯(lián)免疫吸附試驗(enz

4、yme-linked immunosorbent assay,ELISA)法檢測微球載藥量、緩釋性能和微球經(jīng)45℃處理后rhBMP2活性。將PLGA-BMP2微球加入到不飽和聚磷酸酯成骨材料的合成中,得到新型UPPE-PLGA-BMP2(UPB)成骨材料。用掃描電鏡觀測UPB的微觀結(jié)構(gòu),用ELISA法檢測微球載藥量、緩釋性能。將體外培養(yǎng)的第三代骨髓間充質(zhì)細(xì)胞(bone marrow mesenchymal cells,BMMCs)種植于

5、UPB表面,通過觀察BMMCs的黏附和凋亡情況評估UPB的細(xì)胞毒性和生物相容性;通過檢測BMMCs的堿性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性評估UPB中的BMP2的生物活性。
　　結(jié)果：PLGA微球在電鏡下顯示出中空的球狀結(jié)構(gòu),BMP2分布于PLGA微球的球壁。PLGA微球和UPB對BMP2的釋放均具有突釋和緩釋效應(yīng)。UBP能夠有效黏附BMMCs。新合成的UPB的細(xì)胞毒性較大,將其在緩沖液內(nèi)浸泡至少2小時