微管結(jié)合蛋白1輕鏈3與PML發(fā)生相互作用并促進其生長抑制功能.pdf

1、微管結(jié)合蛋白1輕鏈3（microtubule-associated protein1 light chain3，LC3）是最早被發(fā)現(xiàn)定位于哺乳動物自噬體雙層膜結(jié)構(gòu)上的分子之一，因此，它是判斷細胞自噬活性的重要指標。一系列研究顯示，LC3蛋白在細胞漿及細胞核內(nèi)均有分布，目前對LC3分子的功能研究主要集中在定位于胞漿中的LC3在自噬體形成中的作用；然而，對于定位于細胞核內(nèi)的LC3功能研究則非常有限。本課題組先前報道，急性早幼粒細胞性白血病相

2、關(guān)的致病性融合蛋白 PML-RAR?（promyelocytic leukemia-retinoic acid receptor alpha）的表達顯著地增強多種白血病以及非白血病細胞的自噬活性，同時我們發(fā)現(xiàn)PML過表達能夠顯著的扣押部分的LC3蛋白于核中并定位至PML核體結(jié)構(gòu)，提示LC3蛋白也分布于細胞核內(nèi)。在本課題中，我們運用免疫共沉淀技術(shù)以及免疫熒光方法闡明早幼粒細胞性白血病（promyelocytic leukemia，PML）

3、亞基蛋白IV能夠與LC3發(fā)生相互作用，并且該效應(yīng)具有一定的細胞廣譜性。內(nèi)源性免疫沉淀技術(shù)進一步證實，過表達的PML IV也與內(nèi)源性的LC3蛋白存在相互作用，并且主要通過與LC3-II蛋白發(fā)生結(jié)合，提示與磷脂酰乙醇胺（phosphotidylethanolamine，PE）結(jié)合的LC3蛋白可能是與細胞核內(nèi)的PML發(fā)生相互作用的主要形式。此外，內(nèi)源性免疫熒光實驗發(fā)現(xiàn)，生理情況下，部分內(nèi)源性的PML蛋白與LC3蛋白在細胞核內(nèi)發(fā)生共定位現(xiàn)象，并

4、且這一共定位現(xiàn)象在干擾素?（interferon alpha，IFN?）誘導PML高表達的情況下增強，提示PML高表達促進該相互作用的發(fā)生。進一步的研究提示，PML與LC3的相互作用依賴于存在于PML蛋白序列中兩個潛在的LC3相互作用序列（LC3 interacting region motifs，LIR motifs），然而該相互作用并不依賴于細胞自噬活性的發(fā)生。同時，我們發(fā)現(xiàn)PML IV與LC3的相互作用在PML蛋白實施其控制細胞生