重編程相關(guān)lncRNA(lincRNA-ROR)在腦膠質(zhì)瘤中的表達及功能的研究.pdf

1、目的:明確lincRNA-ROR在膠質(zhì)瘤組織及瘤旁正常腦組織中的表達水平。在此基礎(chǔ)上進一步研究lincRNA-ROR在膠質(zhì)瘤細胞及膠質(zhì)瘤干細胞中的生物學(xué)功能,探索其在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展中可能的分子作用機制。
　　方法:
　　1.q-PCR法檢測lincRNA-ROR在膠質(zhì)瘤組織及瘤旁正常腦組織中的表達水平。收集26例膠質(zhì)瘤患者腫瘤及瘤旁正常腦組織手術(shù)標(biāo)本,運用q-PCR技術(shù)檢測lincRNA-ROR在膠質(zhì)瘤組織及瘤旁腦組織的表達

2、水平。并檢測與lincRNA-ROR相關(guān)的兩個基因SOX11及KLF4的表達相關(guān)性情況。
　　2.構(gòu)建LincRNA-RoR shRNA質(zhì)粒,將其轉(zhuǎn)染至膠質(zhì)瘤細胞系中,q-PCR技術(shù)檢測lincRNA-ROR表達情況,下調(diào)lincRNA-RoR的表達后檢測lincRNA-RoR對膠質(zhì)瘤細胞及膠質(zhì)瘤干細胞生物學(xué)特性的影響。膠質(zhì)瘤細胞系培養(yǎng)48小時后使用CD133標(biāo)記腫瘤干細胞,用流式細胞儀檢測CD133+的膠質(zhì)瘤干細胞數(shù)量;MTS分

3、析法檢測U87細胞增殖情況,連續(xù)3天檢測細胞增殖能力;膠質(zhì)瘤細胞系培養(yǎng)7天后,干細胞成球?qū)嶒灆z測下調(diào)lincRNA-RoR后干細胞成球能力。
　　3.構(gòu)建lincRNA-RoR真核表達載體,將其轉(zhuǎn)染至膠質(zhì)瘤細胞系中,q-PCR技術(shù)檢測lincRNA-ROR表達情況。上調(diào)lincRNA-RoR的表達后檢測lincRNA-RoR對膠質(zhì)瘤細胞及膠質(zhì)瘤干細胞生物學(xué)特性的影響。膠質(zhì)瘤細胞系培養(yǎng)48小時后使用CD133標(biāo)記腫瘤干細胞,用流式細

4、胞儀檢測CD133+的膠質(zhì)瘤干細胞數(shù)量;MTS分析法檢測U87細胞增殖情況,連續(xù)3天檢測細胞增殖能力;膠質(zhì)瘤細胞系培養(yǎng)7天后,干細胞成球?qū)嶒灆z測過表達lincRNA-RoR后干細胞成球能力。
　　4.檢測lincRNA-RoR表達下調(diào)及上調(diào)后KLF4的表達情況。
　　結(jié)果:
　　1.lincRNA-RoR在膠質(zhì)瘤組織中的表達明顯低于在瘤旁腦組織中的表達。
　　2.lincRNA-RoR與KLF4 mRNA在膠質(zhì)瘤

5、組織中的表達呈負相關(guān)。與SOX11 mRNA在膠質(zhì)瘤組織中的表達呈正相關(guān)。
　　3.成功的構(gòu)建LincRNA-RoR shRNA質(zhì)粒,將LincRNA-RoR shRNA質(zhì)粒穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染到U87膠質(zhì)瘤細胞。下調(diào)LincRNA-RoR表達后流式細胞儀檢測CD133+的膠質(zhì)瘤干細胞數(shù)量明顯增加;MTS分析法檢測顯示U87膠質(zhì)瘤細胞的增殖能力明顯增強,且隨著時間的推移,增殖程度越加明顯;成球?qū)嶒烇@示膠質(zhì)瘤干細胞成球數(shù)量明顯增加。
　

6、　4.成功的構(gòu)建了PcDNA-lincRNA-RoR質(zhì)粒,將PcDNA-lincRNA-RoR質(zhì)粒穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染到U87膠質(zhì)瘤細胞。上調(diào)LincRNA-RoR表達后流式細胞儀檢測CD133+的膠質(zhì)瘤干細胞數(shù)量明顯下降;MTS分析法檢測顯示 U87膠質(zhì)瘤細胞的增殖能力受到抑制,且隨著時間的推移,增殖程度逐漸下降;成球?qū)嶒烇@示膠質(zhì)瘤干細胞成球數(shù)量明顯減少。
　　5.下調(diào)lincRNA-RoR表達后U87膠質(zhì)瘤細胞KLF4 mRNA表達明顯