毛細(xì)管電泳技術(shù)在二陳湯指紋圖譜研究和植物細(xì)胞單細(xì)胞分析中的應(yīng)用.pdf

1、目的：研究毛細(xì)管電泳技術(shù)在中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究中的應(yīng)用，論文分為兩部分研究內(nèi)容：1.研究毛細(xì)管電泳技術(shù)在中藥指紋圖譜研究的應(yīng)用，建立二陳湯毛細(xì)管電泳指紋圖譜分析方法。2.研究毛細(xì)管電泳單細(xì)胞分析技術(shù)和激光誘導(dǎo)熒光檢測技術(shù)在植物細(xì)胞單細(xì)胞分析中的應(yīng)用，實現(xiàn)單個小麥胚性細(xì)胞內(nèi)氨基酸的分析。 方法：1.利用毛細(xì)管電泳技術(shù)對《局方》二陳湯的水煎液進(jìn)行分析。分離緩沖液：選用35retool/L硼砂(加乙腈濃度至10％)為運行緩沖液(pH 9.

2、0)。用二極管陣列檢測器對譜圖在190nm～300nm進(jìn)行全掃描得三維光譜圖，確定最佳檢測波長為200nm。換用紫外檢測器對二陳湯供試品進(jìn)行檢測，CE條件為：分析運行電壓：25kV，極性從正極到負(fù)極；毛細(xì)管卡盒溫度：25℃；壓力進(jìn)樣：0.5psi×5s。 2.運用毛細(xì)管電泳激光誘導(dǎo)熒光檢測技術(shù)對單個小麥胚性細(xì)胞的氨基酸進(jìn)行檢測。利用電穿孔技術(shù)將熒光素FITC引入到活的原生質(zhì)中進(jìn)行細(xì)胞內(nèi)的衍生。在細(xì)胞內(nèi)的衍生反應(yīng)完成后，進(jìn)行CE-

3、LIF檢測。分離緩沖液：25×10<'-2>mol/L硼砂/1.25×10<'-2>mol/L NaOH-1.20×10<'-4>mol/L幾精胺(pH 9.45)。CE條件為：分析運行電壓：25kV，極性從正極到負(fù)極：毛細(xì)管卡盒溫度：25℃。 結(jié)果：1.確定了二陳湯水煎液電泳分析的最佳緩沖液和最佳電泳條件，初步建立了二陳湯的指紋圖譜，在一個電泳條件下實現(xiàn)了全方中20多個峰的分離，方法上也具有較好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性。 2.

4、采用電穿孔方法將衍生試劑強制導(dǎo)入小麥細(xì)胞中，使氨基酸的衍生反應(yīng)在細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行，這能夠有效得減小細(xì)胞內(nèi)樣品的稀釋。結(jié)合LIF檢測的高靈敏度實現(xiàn)了植物細(xì)胞內(nèi)組分的分析。單個小麥胚性細(xì)胞中10種氨基酸得到了較為理想的分離。 結(jié)論：毛細(xì)管電泳法具有分離模式多、分離效率高、速度快、使用范圍廣、所需樣品量和試劑量少、可直接分析水溶液等特點，在中藥指紋圖譜分析和植物細(xì)胞單細(xì)胞分析中顯示了其優(yōu)越性?？梢灶A(yù)見，毛細(xì)管電泳技術(shù)在中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究中將有