高效毛細管電泳技術(shù)在嗜鉻細胞瘤和神經(jīng)母細胞瘤診斷中的應(yīng)用研究.pdf

1、目的: 應(yīng)用高效毛細管電泳(HPCE)技術(shù)，建立一種可同時檢測隨機尿中香草扁桃酸(VMA)、高香草酸(HVA)和肌酐(creatinine，Cr)的方法，以輔助診斷嗜鉻細胞瘤、神經(jīng)母細胞瘤等相關(guān)疾病。 方法: 1．采用標準品和尿液為分析樣品，分別對緩沖體系、分離模式、檢測波長、分離電壓及毛細管規(guī)格等電泳條件進行優(yōu)化，以實現(xiàn)尿中各待測物與周圍雜峰的基線分離。 2．對本研究建立的HPCE法進行系統(tǒng)的方法學(xué)評價

2、，包括：線性范圍與檢出限、重復(fù)性試驗、回收試驗、干擾試驗以及方法學(xué)對比試驗。 3．收集、檢測健康成人及兒童隨機尿標本各100份，分別建立成人與兒童的VMA/Cr、HVA/Cr參考值范圍(μmol/mmol)；并以本法對5例嗜鉻細胞瘤及2例神經(jīng)母細胞瘤患者的隨機尿標本進行定量分析。 4．選取健康志愿者、嗜鉻細胞瘤及神經(jīng)母細胞瘤患者各1例，分別連續(xù)留取5份隨機尿標本并采用本法進行測定，以動態(tài)觀察各待查者尿液VMA、HVA的周

3、期性排泌特點。 結(jié)果: 1．在毛細管區(qū)帶電泳(capillaryzoneelectrophoresis，CZE)模式下，以120mmol/LNaH2PO4—Na2HPO4(pH6.80)溶液為緩沖液，在非涂層石英毛細管(47cm×75μm內(nèi)徑)中進行電泳。樣品稀釋后直接經(jīng)壓力進樣(1p．S．i．，4s)，20kV電壓下電泳分離后，通過二極管陣列檢測器檢測(λ=200nm)。在該電泳條件下，尿液Cr、VMA和HVA在13m

4、in內(nèi)即可完全出峰，與周圍雜峰達到基線分離。 2．線性評價結(jié)果顯示，VMA、HVA和Cr分別在0～500、0～500和0～4000μmol/L濃度范圍內(nèi)呈良好線性，相關(guān)系數(shù)?介于0.9972～0.9991(P＜0.001)；最低檢出限(S/N=3)分別為1.0、1.0和50.0μmol/L。 3．尿液VMA、HVA和Cr遷移時間的平均批內(nèi)(n=10)變異系數(shù)(CV)分別為0.58％、0.56％和0.25％，平均批間(n=

5、10)CV分別為0.95％、1.00％和0.48％；峰面積的平均批內(nèi)(n=10)CV分別為3.78％、3.97％和2.76％，平均批間(n=10)CV分別為4.60％、4.08％和4.42％。 4．本法具有較高準確性，VMA、HVA和Cr的平均回收率分別為98.36％、93.56％和98.85％；兒茶酚胺、5-羥色胺和清蛋白等對檢測結(jié)果無干擾。 5．方法學(xué)對比試驗結(jié)果顯示，本法與HPLC法有較好的相關(guān)性，兩種方法測得VM

6、A、HVA濃度的相關(guān)系數(shù)分別為0.9549(P＜0.001)和0.9451(P＜0.001)。 6．健康成人與兒童隨機尿標本的VMA/Cr、HVA/Cr比值均呈偏態(tài)分布(n=100)，以百分位數(shù)法建立其95％參考值，成人尿液VMA/Cr、HVA/Cr的參考值分別為0～4.26和0～1.69(μmol/mmol)，兒童尿液VMA/Cr、HVA/Cr的參考值分別為0～10.39和0～4.31(μmol/mmol)。 7．通過

7、對3例待查者隨機尿中VMA、HVA含量的動態(tài)觀察，我們發(fā)現(xiàn)，由于受到體內(nèi)兒茶酚胺動態(tài)分泌以及尿液濃縮、稀釋等因素影響，人體尿液VMA、HVA的濃度在一天內(nèi)呈現(xiàn)較大波動；而相對比值VMA/Cr和HVA/Cr則較穩(wěn)定，數(shù)值變化幅度較小，從而證實了Cr對隨機尿中VMA、HVA含量的糾正作用，同時也說明了以VMA/Cr、HVA/Cr為檢測指標的科學(xué)性與合理性。 結(jié)論: 該法可同時檢測隨機尿中VMA、HVA和Cr含量，樣品用量少，