嚴(yán)重創(chuàng)傷大鼠模型的建立及其外周血mtDNA表達(dá)變化的實驗研究.pdf

1、目的：創(chuàng)傷后機體失控性炎癥反應(yīng)綜合癥已成為全球青壯年的首要死亡原因，細(xì)菌未甲基化CPG-DNA結(jié)構(gòu)是啟動機體固有免疫，導(dǎo)致失控性Sirs的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，mtDNA在結(jié)構(gòu)和功能上與細(xì)菌類似，通過TLR-9激活NF-к B通路并產(chǎn)生炎癥因子，本文主要觀察嚴(yán)重創(chuàng)傷大鼠外周血中mtDNA的表達(dá)變化，觀察mtDNA含量與損傷程度的關(guān)系以及應(yīng)用氯喹及PDTC對炎性指標(biāo)和重要器官的影響。
　　方法：第一部分，嚴(yán)重創(chuàng)傷大鼠模型的制備：1雙股骨干骨折大

2、鼠模型的制備；2.失血性休克模型大鼠模型的制備；3.雙股骨干骨折合并失血性休克模型大鼠模型的制備。第二部分將大鼠分為4組：1.單純雙股骨干骨折組(n=21)2.單純失血性休克組(n=21)3.雙股骨干骨折骨折合并失血性休克組(n=21)4.對照組(n=3)第三部分將大鼠分為4組：1.雙股骨干骨折骨折合并失血性休克+氯喹(10mg/kg)組(n=21)2.雙股骨干骨折骨折合并失血性休克+氯喹(30mg/kg)組(n=21)3.雙股骨干骨折

3、骨折合并失血性休克+PDTC(30mg/kg)組(n=21)4.雙股骨干骨折骨折合并失血性休克+PDTC(120mg/kg)組(n=21)后兩部分分別在2小時、4小時、8小時、16小時、24小時、48小時和72小時，用酶聯(lián)免疫吸附試驗法(ELISA)觀測外周血中TNF-α、IL-10、IL-6、的表達(dá)水平；用實時定量PCR(Rea1-time PCR)檢測肺組織中NF-к B亞單位p65mRNA、I-к BmRNA、TLR9mRNA的表

4、達(dá)；熒光定量PCR檢測外周血中mtDNA的水平；HE染色觀察肝、肺、腎、腸的病理學(xué)變化。實驗資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤(x±s)表示。所有數(shù)據(jù)運用SPSS17.0統(tǒng)計軟件采用單因素方差分析(one way ANoVA)。
　　結(jié)果：1.改進(jìn)后的雙股骨干骨折合并失血性休克模型造模成功率高，死亡率低，穩(wěn)定性及可重復(fù)性好，能較好的模擬臨床高能量創(chuàng)傷；2.創(chuàng)傷后的3組大鼠血液中mtDNA的含量，血中IL-6、TNF-a的含量均呈現(xiàn)出高峰并在隨后

5、呈現(xiàn)逐步下降趨勢，IL-10出現(xiàn)逐步下降而后逐漸升高趨勢，但幾種因子濃度升高的幅度在三組動物中呈現(xiàn)出明顯的不同，失血性休克+股骨干骨折組升高的幅度明顯大于單純失血性休克組和單純雙股骨干骨折組；3.線粒體DNA與損傷程度關(guān)系：損傷越重，外周血線粒體DNA濃度越高，炎癥因子濃度越高。肺組織損傷積分越高，可作為損傷程度的預(yù)警指標(biāo)；4.嚴(yán)重創(chuàng)傷大鼠外周血的線粒體DNA濃度與炎性指標(biāo)和肺組織中p65mRNA、TLR-9mRNA呈現(xiàn)正相關(guān)；5.p6