HBS1L-MYB基因、BCL11A基因和HBG基因與胎兒血紅蛋白相關(guān)性的研究.pdf

1、第一部分HBS1L-MYB、BCL11A和HBG基因多態(tài)性和胎兒血紅蛋白數(shù)量性狀相關(guān)性的研究
　　目的:為了探討影響胎兒血紅蛋白(fetal hemoglobin，HbF)和其他血液學(xué)參數(shù)的分子機(jī)制，根據(jù)全基因組關(guān)聯(lián)性研究結(jié)果選擇HBS1 L-MYB、BCL11A、HBG2和CSNK2A1基因中17個單核苷酸多態(tài)性位點并分析它們與HbF和其他血液學(xué)參數(shù)的相關(guān)性。
　　方法:對來自廣西的312個無親緣關(guān)系的β地中海貧血個體，檢

2、測其血紅蛋白類型、紅細(xì)胞(red blood cell，RBC)計數(shù)和血紅蛋白(hemoglobin，Hb)水平，應(yīng)用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長度多態(tài)性及DNA測序法分析其基因型。用Haploview v.4.2軟件檢驗各SNP位點Hardy-Weinberg平衡和相互間的連鎖不平衡。用SPSS16.0軟件檢驗各位點與HbF、RBC和Hb的相關(guān)性。最后用Haplo.state軟件推斷出有意義的單體型。
　　結(jié)果:有10個SNP和H

3、bF水平相關(guān)，其中在HBS1L-MYB基因中有7個SNP和HbF水平相關(guān)，有1個SNP和RBC計數(shù)、Hb相關(guān)。在BCL11A基因中有兩個SNP和HbF水平相關(guān)，在HBG2基因中有1個SNP和HbF水平相關(guān)。BCL11A和HBG2基因中SNP和紅細(xì)胞計數(shù)、Hb無相關(guān)性。除此以外HBS1L-MYB和BCL11A的單體型與HbF水平相關(guān)，HBS1L-MYB單體型與紅細(xì)胞計數(shù)和Hb相關(guān)，BCL11A和HBG2的單體型與紅細(xì)胞計數(shù)無關(guān)聯(lián)性。CSN

4、K2A1基因rs6037828和血液學(xué)參數(shù)無關(guān)聯(lián)性。
　　結(jié)論:HBS1L-MYB、BCL11A和HBG這3個獨立的區(qū)域與紅細(xì)胞參數(shù)有關(guān)聯(lián)性，本研究在廣西β地中海貧血人群中驗證了全基因組關(guān)聯(lián)性研究的結(jié)果，對于進(jìn)一步研究HbF升高及紅細(xì)胞的生成有重要意義。
　　第二部分重型β地中海貧血外周血單個核細(xì)胞BCL11A基因表達(dá)水平的研究
　　目的:探討重型β地中海貧血患者外周血單個核細(xì)胞(peripheral bloodmon

5、onuclear cells,PBMCs)中BCL11A基因mRNA的表達(dá)特點。
　　方法:入選35例重型β地中海貧血患者作為病例組;40例健康體檢者為對照組，并檢測紅細(xì)胞計數(shù)和血紅蛋白量。提取新鮮外周血PBMCs中的總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用SYBR GreenⅠ實時熒光定量PCR(RT-PCR)和相對定量分析方法，以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，

6、GAPDH）基因為內(nèi)參，檢測兩組PBMCs中BCL11A基因的表達(dá)情況。采用相對定量2-△△Ct法進(jìn)行mRNA相對表達(dá)量的比較。BCL11A基因mRNA相對表達(dá)量和紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白量、年齡和性別的相關(guān)分析中雙變量符合正態(tài)分布的計量資料采用Pearson相關(guān)分析，其他變量采用Spearman相關(guān)分析。
　　結(jié)果:實時熒光定量PCR檢測BCL11A基因mRNA在兩組中的表達(dá)，對照組BCL11A基因表達(dá)水平較病例組的高，兩組之間差別

7、有統(tǒng)計學(xué)意義。在重型β地中海貧血患者中BCL11A基因mRNA表達(dá)水平較校準(zhǔn)品最低為0.81倍，最高為2.82倍;對照組中BCL11A基因mRNA表達(dá)水平較校準(zhǔn)品最低為2.29倍，最高為4.92倍，存在明顯的個體差異。BCL11A基因mRNA的相對表達(dá)量與紅細(xì)胞計數(shù)、血紅蛋白量、性別和年齡無相關(guān)性。
　　結(jié)論:重型β地中海貧血患者BCL11A基因mRNA的相對表達(dá)量表達(dá)下降，BCL11A基因mRNA的低表達(dá)可能在γ珠蛋白基因持續(xù)表