喬松素對(duì)脂多糖致人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞損傷的保護(hù)作用.pdf

1、目的： 采用脂多糖(lipopolysaceharide，LPS)誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbilical vascular endothelial cells，HUVECs)活化，復(fù)制體外血管內(nèi)皮細(xì)胞 (vascul-ar endothelial cells，VECs) 損傷模型，觀察喬松素對(duì)損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞的影響，從而探討喬松素對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞可能的保護(hù)作用及其機(jī)制，為蜂膠黃酮化合物抗動(dòng)脈粥樣硬化 (Ather

2、osclerosis，AS)的作用提供理論依據(jù)。 方法： 1.膠原酶消化灌注法培養(yǎng)HUVECs。 2.硅膠柱層析法和質(zhì)譜法分離鑒定泰安柏樹(shù)蜂膠中黃酮類化合物喬松素。 3.建立人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞脂多糖損傷模型。 4.倒置顯微鏡下觀察HUVECs的形態(tài)變化。 5.MTT比色法觀察喬松素對(duì)HUVECs活性的影響。 6.酶聯(lián)免疫雙抗體夾心法(enzyme linked immunosor

3、bent assay，ELISA)檢測(cè)細(xì)胞上清液中血管假血友病因子(von Willebrand factor,v WF)含量。 7.脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法(Terminal-deoxynucleotidylTransferase mediated Nick End Labeling，TUNEL)檢測(cè)HUVECs凋亡率。 結(jié)果： 1、MTT法觀察HUVECs活性：模型組HUVECs活性低于對(duì)

4、照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。100～200mg/L 喬松素可抑制LPS誘導(dǎo)的HUVECs活性降低，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)，呈現(xiàn)一定的濃度和時(shí)間依賴趨勢(shì)。 2、ELISA 法檢測(cè) vWF 含量：模型組 vWF 含量高于對(duì)照組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。不同濃度喬松素組vWF含量低于模型組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，呈現(xiàn)一定的濃度和時(shí)間依賴趨勢(shì)。 3、TUNEL 法檢測(cè) HUVECs 凋亡

5、率：模型組內(nèi)皮細(xì)胞凋亡率高于對(duì)照組，不同濃度喬松素組HUVECs凋亡率低于模型組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。結(jié)果呈現(xiàn)出一定的喬松素濃度和時(shí)間依賴趨勢(shì)。 4、喬松素與辛伐他汀鈉聯(lián)合用藥：析因分析結(jié)果顯示，喬松素或辛伐他汀鈉單一藥物預(yù)處理組與未用藥物組比較，細(xì)胞活性增強(qiáng)、細(xì)胞凋亡率及vWF含量均降低，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；用喬松素和辛伐他汀鈉聯(lián)合預(yù)處理組與單一藥物預(yù)處理組比較，細(xì)胞活性增強(qiáng)、細(xì)胞凋亡率及vWF含量均降低，

6、有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。各項(xiàng)指標(biāo) A2 水平和B2水平的均數(shù)之差均