大腸癌細(xì)胞MLH1基因甲化發(fā)生機(jī)制研究.pdf

1、目的：通過對(duì)大腸癌細(xì)胞系及正常組織進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，我們分析了其MLH1基因內(nèi)從啟動(dòng)子到第一內(nèi)含子區(qū)域（含啟動(dòng)子、第一外顯子及第一內(nèi)含子中的Alu 序列）甲基化的具體情況，并進(jìn)一步分析其產(chǎn)生的可能原因，為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)提供依據(jù)。
　　 方法：選擇RKO、SW48 兩個(gè)大腸癌細(xì)胞系作為實(shí)驗(yàn)樣本，正常的大腸組織和人外周血液樣本作為實(shí)驗(yàn)對(duì)照。提取DNA后重亞硫酸亞處理并進(jìn)行BSP（Bisulfate-sequencing PCR，亞硫酸氫鹽修飾

2、后測(cè)序法PCR）和MSP（Methylation-specific PCR，甲基化特異性PCR）。將PCR產(chǎn)物或者克隆產(chǎn)物測(cè)序，對(duì)測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析比較。
　　 結(jié)果：大腸癌細(xì)胞系啟動(dòng)子區(qū)域的甲基化程度很高，而正常對(duì)照組織在此區(qū)域是非甲基化的；大腸癌細(xì)胞系第一內(nèi)含子內(nèi)Alu 序列的甲基化程度相較于正常組織有所降低；位于啟動(dòng)子與內(nèi)含子之間的區(qū)域里，大腸癌細(xì)胞系發(fā)生較高程度的甲基化，而正常組織是非甲基化的，且只局限在臨近第一個(gè)Alu