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1、背景與目的:視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(Retinoblastoma,RB)是嬰幼兒中最常見的眼內(nèi)惡性腫瘤,發(fā)病率約為1:15000至1:28000,其死亡率約為5%[1]。引起患者死亡的主要原因是腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移。而腫瘤的生長(zhǎng)、侵襲、轉(zhuǎn)移都依賴于腫瘤新生血管的生成。血管生成對(duì)實(shí)體瘤的快速生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移非常重要,是腫瘤研究的熱點(diǎn)。研究表明,在腫瘤血管生長(zhǎng)過程中,血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascular endothelial growth factor,VE
2、GF)起著重要的作用。胎盤生長(zhǎng)因子(placenta growth factor,PIGF)系VEGF家族新成員,已發(fā)現(xiàn)在一些腫瘤中有不同程度的表達(dá),但對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的研究相對(duì)缺乏資料,本試驗(yàn)通過對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的VEGF、PIGF的表達(dá)研究,探討VEGF、PIGF在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織的表達(dá)水平之間的相關(guān)性,以進(jìn)一步明確視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤預(yù)后影響因素,指導(dǎo)臨床治療,提高患者生存率。 材料及方法: 1.材料 收集沈陽
3、軍區(qū)總醫(yī)院和中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬一院病理科1965~2005年的RB標(biāo)本30例,年齡從6月到6歲不等,其中男18例,女12例。所選蠟塊重新切片,HE染色及形態(tài)學(xué)復(fù)習(xí)。 2.方法 免疫組化方法:PIGF多克隆抗體購自美國(guó)SantaCruz公司,CD34、VEGF單克隆抗體均由上海長(zhǎng)島試劑公司提供,采用鏈霉菌抗生物素蛋白一氧化物酶連接法(Streptavidin/Peroxidase,SP)按常規(guī)步驟進(jìn)行,除一抗分別為CD34、
4、VEGF、PIGF外,其余步驟均相同。陰性對(duì)照采用0.01MPBS液體代替一抗,其他步驟不變,陽性對(duì)照采用內(nèi)對(duì)照。 3.結(jié)果判定 3.1 腫瘤微血管密度(MVD)判斷標(biāo)準(zhǔn):CD34標(biāo)記微血管,計(jì)算腫瘤內(nèi)著色的毛細(xì)血管和微小血管。按照Weidner[2]的評(píng)判標(biāo)準(zhǔn),凡呈現(xiàn)棕色單個(gè)內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇均作為1個(gè)血管計(jì),但肌層較厚及管腔面積大于8個(gè)紅細(xì)胞直徑的血管不計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)方法:在200倍視野下計(jì)數(shù)每個(gè)視野內(nèi)CD34陽性血管
5、數(shù),每例隨機(jī)選擇4個(gè)不重復(fù)的視野進(jìn)行計(jì)數(shù),求出平均值,計(jì)算每例單位視野內(nèi)平均血管數(shù),即為該例腫瘤的微血管密度(microvessel-density,MVD)值(個(gè)/X200)。 3.2 VEGF、PIGF判斷標(biāo)準(zhǔn):VEGF與PIGF均在以細(xì)胞漿呈現(xiàn)棕黃色著色,CD34表達(dá)陽性為血管內(nèi)皮細(xì)胞被染成黃褐色。 3.3統(tǒng)計(jì)分析:數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)應(yīng)用SPSS11.5軟件,采用X2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)和Spearman等級(jí)相關(guān)分析。 結(jié)果
6、:VEGF在66.67%(20/30)的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織表達(dá)。VEGF在有或無視神經(jīng)浸潤(rùn)的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中均有不同程度的表達(dá),兩者之間差異性(P<0.05)。VEGF陽性的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織MVD為36.2±2.4/X200。VEGF陰性組織中MVD為21.1±3.2/X200,兩者比較有顯著性差異(P<0.01)。PIGF陽性視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織MVD為33.1±2.4/X200,PIGF陰性視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織為30.8±2.6/
7、X200,兩者差異亦呈顯著性(P<0.01)。視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中PIGF、VEGF蛋白表達(dá)陽性率和MVD呈明顯正相關(guān)。免疫組化檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn),在30例視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中,未分化型視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤MVD值與分化型視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤MVD差異亦顯著性差異(P<0.01)。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn),在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中,VEGF表達(dá)與MVD值呈明顯正相關(guān)(r=0.541,P<0.01),PIGF表達(dá)與MVD值亦呈明顯正相關(guān)(r=0.392,p<0.01)。對(duì)比PIGF
8、與VEGF在MVD的表達(dá)上有明顯相關(guān)。 結(jié)論: 1、VEGF在二型視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中均有不同程度的表達(dá),兩者有顯著差異性。 2、PIGF在二型視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中均有不同程度的表達(dá),兩者有顯著差異性。 3、VEGF在有或無視神經(jīng)浸潤(rùn)的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中均有不同程度的表達(dá),兩者有顯著差異性。 4、VEGF、PIGF在二型視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤,尤其是未分化型視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤血管生成中發(fā)揮協(xié)同作用,兩者之間
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