VEGF、PIGF與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤血管新生的相關(guān)性研究.pdf

1、背景與目的：視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(Retinoblastoma，RB)是嬰幼兒中最常見的眼內(nèi)惡性腫瘤，發(fā)病率約為1：15000至1：28000，其死亡率約為5％[1]。引起患者死亡的主要原因是腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移。而腫瘤的生長、侵襲、轉(zhuǎn)移都依賴于腫瘤新生血管的生成。血管生成對實(shí)體瘤的快速生長和轉(zhuǎn)移非常重要，是腫瘤研究的熱點(diǎn)。研究表明，在腫瘤血管生長過程中，血管內(nèi)皮生長因子(Vascular endothelial growth factor，VE

2、GF)起著重要的作用。胎盤生長因子(placenta growth factor，PIGF)系VEGF家族新成員,已發(fā)現(xiàn)在一些腫瘤中有不同程度的表達(dá)，但對視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的研究相對缺乏資料，本試驗(yàn)通過對視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的VEGF、PIGF的表達(dá)研究，探討VEGF、PIGF在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織的表達(dá)水平之間的相關(guān)性，以進(jìn)一步明確視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤預(yù)后影響因素，指導(dǎo)臨床治療，提高患者生存率。 材料及方法： 1.材料 收集沈陽

3、軍區(qū)總醫(yī)院和中國醫(yī)科大學(xué)附屬一院病理科1965～2005年的RB標(biāo)本30例，年齡從6月到6歲不等，其中男18例，女12例。所選蠟塊重新切片，HE染色及形態(tài)學(xué)復(fù)習(xí)。 2.方法 免疫組化方法：PIGF多克隆抗體購自美國SantaCruz公司，CD34、VEGF單克隆抗體均由上海長島試劑公司提供，采用鏈霉菌抗生物素蛋白一氧化物酶連接法(Streptavidin/Peroxidase，SP)按常規(guī)步驟進(jìn)行，除一抗分別為CD34、

4、VEGF、PIGF外，其余步驟均相同。陰性對照采用0.01MPBS液體代替一抗，其他步驟不變，陽性對照采用內(nèi)對照。 3．結(jié)果判定 3.1 腫瘤微血管密度(MVD)判斷標(biāo)準(zhǔn)：CD34標(biāo)記微血管，計(jì)算腫瘤內(nèi)著色的毛細(xì)血管和微小血管。按照Weidner[2]的評判標(biāo)準(zhǔn)，凡呈現(xiàn)棕色單個內(nèi)皮細(xì)胞或內(nèi)皮細(xì)胞簇均作為1個血管計(jì)，但肌層較厚及管腔面積大于8個紅細(xì)胞直徑的血管不計(jì)數(shù)。計(jì)數(shù)方法：在200倍視野下計(jì)數(shù)每個視野內(nèi)CD34陽性血管

5、數(shù)，每例隨機(jī)選擇4個不重復(fù)的視野進(jìn)行計(jì)數(shù)，求出平均值，計(jì)算每例單位視野內(nèi)平均血管數(shù)，即為該例腫瘤的微血管密度(microvessel-density，MVD)值(個/X200)。 3.2 VEGF、PIGF判斷標(biāo)準(zhǔn)：VEGF與PIGF均在以細(xì)胞漿呈現(xiàn)棕黃色著色，CD34表達(dá)陽性為血管內(nèi)皮細(xì)胞被染成黃褐色。 3.3統(tǒng)計(jì)分析：數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)應(yīng)用SPSS11.5軟件，采用X2檢驗(yàn)、t檢驗(yàn)和Spearman等級相關(guān)分析。 結(jié)果

6、：VEGF在66.67％(20/30)的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織表達(dá)。VEGF在有或無視神經(jīng)浸潤的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中均有不同程度的表達(dá)，兩者之間差異性(P<0.05)。VEGF陽性的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織MVD為36．2±2.4/X200。VEGF陰性組織中MVD為21.1±3.2/X200，兩者比較有顯著性差異(P<0.01)。PIGF陽性視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織MVD為33.1±2.4/X200，PIGF陰性視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織為30.8±2.6/

7、X200，兩者差異亦呈顯著性(P<0.01)。視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中PIGF、VEGF蛋白表達(dá)陽性率和MVD呈明顯正相關(guān)。免疫組化檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在30例視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中，未分化型視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤MVD值與分化型視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤MVD差異亦顯著性差異(P<0.01)。相關(guān)分析發(fā)現(xiàn)，在視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中，VEGF表達(dá)與MVD值呈明顯正相關(guān)(r=0.541，P<0.01)，PIGF表達(dá)與MVD值亦呈明顯正相關(guān)(r=0.392，p<0.01)。對比PIGF

8、與VEGF在MVD的表達(dá)上有明顯相關(guān)。 結(jié)論： 1、VEGF在二型視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中均有不同程度的表達(dá)，兩者有顯著差異性。 2、PIGF在二型視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中均有不同程度的表達(dá)，兩者有顯著差異性。 3、VEGF在有或無視神經(jīng)浸潤的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤組織中均有不同程度的表達(dá)，兩者有顯著差異性。 4、VEGF、PIGF在二型視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，尤其是未分化型視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤血管生成中發(fā)揮協(xié)同作用，兩者之間