視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的臨床化療與誘導(dǎo)分化研究.pdf

1、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤(Rb)是小兒最常見(jiàn)的眼內(nèi)惡性腫瘤，隨著早期診斷、早期治療及治療方法的不斷改進(jìn)，其生存率目前在美國(guó)達(dá)95％，在世界范圍約為50％。手術(shù)摘除眼球雖然較為安全，但創(chuàng)傷較大，降低了患者的生存質(zhì)量。外放射是一種有效的治療方法，但因其可產(chǎn)生嚴(yán)重的并發(fā)癥，現(xiàn)在已不作為首選治療。藥物治療始終是一個(gè)焦點(diǎn)，在發(fā)達(dá)國(guó)家化學(xué)減容療法治療眼內(nèi)期視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤取得顯著成績(jī)，對(duì)有復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移高危因素的患者術(shù)后輔助化療提高了患者的生存率，對(duì)顱內(nèi)蔓延和遠(yuǎn)處

2、轉(zhuǎn)移患者的治療不斷改進(jìn)。但傳統(tǒng)化療仍存在很多不足，如藥物對(duì)正常組織細(xì)胞的殺傷；反復(fù)用藥后產(chǎn)生耐藥性等。因此在尋找新藥的同時(shí)，還要尋找藥物治療的新途徑。 腫瘤分化治療與傳統(tǒng)化療不同，它是通過(guò)分化劑的誘導(dǎo)使畸形分化的腫瘤細(xì)胞向正常表型細(xì)胞的終末方向分化，抑制其增殖，分化治療在白血病的治療中已顯示出巨大潛力。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，分化劑可同樣抑制實(shí)體腫瘤細(xì)胞的增殖并促使其向正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化。Rb起源于視網(wǎng)膜多能干細(xì)胞，在分化劑的誘導(dǎo)下可向多個(gè)正常

3、細(xì)胞表型分化。但細(xì)胞的分化受多種因素調(diào)控，Hedgehog信號(hào)通路是在動(dòng)物胚胎發(fā)育過(guò)程中起重要作用的信號(hào)通路之一，尤其在視網(wǎng)膜細(xì)胞分化中起重要作用。已證實(shí)多種腫瘤的發(fā)生與Hedgehog信號(hào)通路的異常有密切關(guān)系，該通路的抑制劑cyclopamine對(duì)某些腫瘤的生長(zhǎng)產(chǎn)生明顯的抑制作用甚至使腫瘤消失。因此本研究擬探討視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的誘導(dǎo)分化及Hedgehog信號(hào)通路各成份的表達(dá)，為進(jìn)一步研究視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的靶向治療打下基礎(chǔ)。 第一部

4、分藥物治療視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的臨床病例分析 目的：探討化療對(duì)患者生存及預(yù)后的影響及觀察化學(xué)減容療法對(duì)眼內(nèi)期視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的療效。 方法：收集1997～2004年于中山眼科中心診治的268例Rb患者資料，隨訪了135例，其中男80例，女55例；單眼107例，雙眼28例。分析這些患者的一般狀況、治療情況及其對(duì)生存的影響、腫瘤的病理侵襲范圍及其對(duì)生存的影響、生存與死亡情況。 對(duì)行化學(xué)減容治療眼內(nèi)期Rb的14例患者15只眼進(jìn)

5、行隨訪觀察，其中男8例，女6例；單側(cè)1例，雙側(cè)13例。分析患者的一般狀況、腫瘤特征、治療前后腫瘤的變化、預(yù)后情況。 用SPSS13.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。結(jié)果：Rb患者1、2、3、4、5年的生存率分別為84％、83％、83％、81％、81％。眼外期患者中化療組生存率明顯高于未經(jīng)化療組，兩者間有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000)。視神經(jīng)、脈絡(luò)膜、鞏膜、前房是否受累的生存率間分別有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P值均＜0.05)，但視神經(jīng)合并脈絡(luò)膜受累并

6、沒(méi)有進(jìn)一步降低視神經(jīng)受累的生存率(P=0.181)。視神經(jīng)、脈絡(luò)膜、鞏膜、前房受累、化療及植入義眼座對(duì)死亡風(fēng)險(xiǎn)的危險(xiǎn)比分別為4.881，1.147，3.007，1.550，0.051，0.136。 化學(xué)減容前眼內(nèi)腫瘤基底最大直徑平均為10.27mm(5.61～18.8mm)，最大厚度平均為6.29mm(1.77～11.28mm)；治療結(jié)束后分別為4.77mm(1.5～7.25mm)、2.47mm(1.41～5mm，2例厚度不祥)

7、，比化療前分別減少了53.6％(-0.2％～60.1％)、50.6％(28.6％～83.2％)?；瘜W(xué)減容療法總有效率為46.7％，無(wú)效率為53.3％，眼球保留率為40％。多數(shù)患者可耐受化療，無(wú)嚴(yán)重并發(fā)癥發(fā)生。 結(jié)論：影響患者預(yù)后的病理高危因素依次為視神經(jīng)、鞏膜、前房、脈絡(luò)膜受累。術(shù)后輔助化療提高了有復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移高危因素的視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤患者的生存和預(yù)后?；瘜W(xué)減容療法對(duì)眼內(nèi)期視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤有一定療效，是一種有潛力的保守治療方法。

8、 第二部分視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤的體外分化研究 目的：觀察全反式維甲酸(ATRA)對(duì)視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤S0—Rb50細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用及S0—Rb50細(xì)胞向正常細(xì)胞表型分化的情況。 方法：用0、10-7、10-6、10-5M的ATRA作用于S0—Rb50細(xì)胞，繪制生長(zhǎng)曲線；MTT法檢測(cè)ATRA的IC50值；10-5M的ATRA作用于細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀測(cè)定用藥前及用藥后1、2、3、7天的細(xì)胞周期；觀察用藥前及用藥后20天活體細(xì)胞和H

9、E染色細(xì)胞形態(tài)；免疫組化法檢測(cè)用藥前及用藥后20天NSE、Vimentin、GFAP的表達(dá)情況。 結(jié)果：0、10-7、10-6、10-5M的ATRA作用于SO—Rb50細(xì)胞后細(xì)胞生長(zhǎng)曲線逐漸變得低平；ATRA作用于細(xì)胞的IC50值約為10-5M；用10-5M的ATRA作用后，GO/G1期細(xì)胞從用藥前的56.5％升至用藥后的66.6％～81.0％，S期細(xì)胞則從33.1％降至22.3％～15.9％，用藥后48小時(shí)作用達(dá)高峰。細(xì)胞在包

10、被0.25％多聚賴氨酸溶液的載玻片上可貼壁生長(zhǎng)，用藥后細(xì)胞生長(zhǎng)集落明顯減小，20天后部分細(xì)胞呈橢圓形或梭形，核漿比值減小，并伸出細(xì)長(zhǎng)或較短的突起；用藥前NSE染色中等陽(yáng)性，Vimentin染色強(qiáng)陽(yáng)性，GFAP染色陰性；用藥20天后NSE與Vimentin染色呈強(qiáng)陽(yáng)性，GFAP染色呈中等陽(yáng)性。 結(jié)論：ATRA對(duì)S0—Rb50細(xì)胞的生長(zhǎng)有明顯抑制作用，使細(xì)胞停滯于細(xì)胞周期的GO/G1期。ATRA對(duì)Eb細(xì)胞有誘導(dǎo)分化作用并促使細(xì)胞向神

11、經(jīng)元和膠質(zhì)細(xì)胞方向分化。 第三部分視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤中Hedgehog通路相關(guān)信號(hào)因子的表達(dá) 目的：探討SHH信號(hào)因子在Rb發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的作用，尋找治療Rb的更特異性的靶向治療途徑。 方法：選取2004年4月～2004年8月因視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤于我院行患眼摘除的17例患兒中的8例含較多活性腫瘤組織的標(biāo)本。男性5例，女性3例；雙眼1例，單眼7例。用RT一PCR方法檢測(cè)Hedgehog信號(hào)通路相關(guān)因子SHH、PTC、SMO

12、、GLI1蛋白基因在Rb細(xì)胞中的表達(dá)情況。 結(jié)果：8份標(biāo)本中4份表達(dá)SHH，3份表達(dá)PTC，5份表達(dá)SMO，4份表達(dá)GLI1。表達(dá)產(chǎn)物分別為233bp、144bp、140bp、412bp。陽(yáng)性標(biāo)本外觀上均呈灰白色半透明膠狀，幾乎無(wú)鈣化灶。病理上7例為眼內(nèi)期，1例為眼外期。 結(jié)論：SHH信號(hào)通路的異?；罨赡軈⑴c了Rb的發(fā)生，在抑制Rb細(xì)胞分化、維持Eb細(xì)胞活性、促進(jìn)Rb發(fā)展中有一定的作用。抑制SHH信號(hào)通路的異?；罨赡?/p>