SPHK1在胃癌裸鼠移植瘤血管生成中的作用及其機制的探討.pdf

1、目的：1.研究鞘氨醇激酶-1(sphingosine kinase-1，SphK1)在胃癌裸鼠移植瘤生長時血管生成中的作用;2.探討其在血管生成中的作用機制，從而為胃癌新的靶向治療提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：將體外培養(yǎng)的人胃癌細(xì)胞SGC-7901于對數(shù)期生長期，調(diào)整細(xì)胞濃度后注射至裸鼠皮下，建立人胃癌裸鼠移植瘤模型，建模成功后根據(jù)腫瘤大小將荷瘤裸小鼠隨機分為4組，每組8只，分別予以腹腔注射生理鹽水(normal saline，NS)

2、、神經(jīng)鞘氨醇激酶抑制劑（sphingosine kinase inhibitorⅡ，SKI-Ⅱ）、順鉑(cisplatin，DDP)、SKI-Ⅱ聯(lián)合DDP進行干預(yù)治療，1次/周，共3周;每隔3天測一次腫瘤大小，繪制腫瘤生長曲線，計算抑瘤率及觀察治療前后荷瘤裸鼠體重的變化;在治療結(jié)束后全部脫頸處死荷瘤裸鼠，取下瘤體組織:Western Blot法檢測瘤體中SphK1、VEGF的表達(dá);免疫組化方法檢測瘤體SphK1、VEGF和CD34的表達(dá)

3、情況及計算瘤體內(nèi)微血管密度（microvessel density，MVD），檢測抑制腫瘤血管生成情況。取下肝臟組織，HE染色觀察干預(yù)治療的毒性作用。
　　結(jié)果：
　　1.成功構(gòu)建人胃癌裸鼠皮下移植瘤模型。
　　2.腫瘤生長抑制曲線顯示:與對照組相比，3組治療組均有抑制腫瘤生長作用，SKI-Ⅱ組、DDP組抑瘤率分別是:48.69±1.39％、75.24±1.19％;其中以SKI-Ⅱ聯(lián)合DDP組抑瘤作用最為明顯，抑瘤率達(dá)

4、90.25±1.53％，各組抑瘤率之間差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3.免疫組化結(jié)果示:與NS組相比，SKI-Ⅱ及SKI-Ⅱ聯(lián)合DDP可顯著下調(diào)腫瘤SphK1、VEGF蛋白的表達(dá)(P＜0.05)，減少瘤體內(nèi)的MVD差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，單用DDP對SphK1、VEGF的表達(dá)及瘤體內(nèi)MVD差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。經(jīng)Pearson相關(guān)分析，瘤體組織SphK1與VEGF的表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.968，

5、P＜0.01)。瘤體組織MVD計數(shù)與VEGF表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.862，P＜0.01)。
　　4.Western Blot結(jié)果顯示:與NS組相比，SKI-Ⅱ及SKI-Ⅱ聯(lián)合DDP組不同程度下調(diào)SphK1和VEGF的表達(dá)，與對照組相比差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，單用DDP對SphK1、VEGF的表達(dá)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。
　　5.各干預(yù)治療組肝臟病理HE染色未見明顯差異。
　　結(jié)論： SphK1對實