alphastatin抑制胃癌細(xì)胞裸鼠移植瘤血管新生的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、胃癌是一種常見的危害人類健康的疾病，其治療方式主要依賴于手術(shù)切除，術(shù)后采用以化療為主的輔助治療。研究表明，胃癌血管新生在其發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要作用。近年來，腫瘤血管新生抑制劑已成為惡性腫瘤治療領(lǐng)域的熱點(diǎn)，有些正在臨床試驗(yàn)中。alphastatin具有很強(qiáng)的抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞管狀結(jié)構(gòu)形成和抗鼠源性CT26生長(zhǎng)的作用，顯示出良好的應(yīng)用前景。為此，我們開展了alphastatin治療胃癌及其作用機(jī)理的研究。目的是評(píng)價(jià)alphastat

2、in抑制胃癌血管新生的可行性和有效性，為進(jìn)一步研究治療其他惡性腫瘤提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)；進(jìn)一步探討alphastatin發(fā)揮血管新生的作用機(jī)制，為闡述其生物學(xué)活性提供理論依據(jù)。 利用標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞分離方法獲得人血管內(nèi)皮細(xì)胞(HUVECs)。我們分別觀察了alphastatin對(duì)HUVECs遷移、增殖和管狀結(jié)構(gòu)形成等功能的影響。體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，alphastatin對(duì)HUVECs增殖無明顯影響，也不會(huì)產(chǎn)生細(xì)胞毒性。alphastatin可明顯

3、抑制由HGF趨化引起HUVECs的遷移功能和Matrigel管狀結(jié)構(gòu)形成的作用，且呈現(xiàn)一定的量-效關(guān)系。隨后，我們分別觀察了alphastatin對(duì)裸鼠體內(nèi)MatrigelPlug新生血管和裸鼠移植人胃癌腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)狀況的影響，并對(duì)腫瘤組織進(jìn)行病理學(xué)檢查。MatrigelPlug結(jié)果表明，alphastatin幾乎能夠完全抑制裸鼠體內(nèi)新生血管的形成。通過裸鼠皮下注射人源性胃癌細(xì)胞(BGC823)，我們建立了裸鼠移植瘤模型，對(duì)觀察組裸鼠腹

4、腔注射alphastatin，2周后分析裸鼠瘤體大小、重量、腫瘤血管密度等多項(xiàng)指標(biāo)。裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，隨著劑量的增大，alphastatin抑制腫瘤體積和重量的效應(yīng)更加明顯。組織病理學(xué)分析表明，觀察組腫瘤組織內(nèi)部血管數(shù)目較對(duì)照組中減少。 基于鞘脂類生長(zhǎng)因子(尤其SPK，S1P)在血管新生方面扮演角色的理論基礎(chǔ)。我們觀察了alphastatin對(duì)腫瘤組織內(nèi)分離的血管內(nèi)皮細(xì)胞SPK活性的影響。將血管內(nèi)皮細(xì)胞經(jīng)alphastat

5、in進(jìn)行預(yù)處理，提取細(xì)胞總蛋白，測(cè)定細(xì)胞內(nèi)SPK活性。結(jié)果證實(shí)，alphastatin能夠降低血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)SPK活性，呈現(xiàn)量-效關(guān)系。當(dāng)作用時(shí)間為6h時(shí)，血管內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)SPK活性降低最明顯，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)，SPK活性有所恢復(fù)。 通過以上結(jié)果，我們可以得出：(1).alphastatin體外發(fā)揮抑制HUVECs遷移及管狀結(jié)構(gòu)形成的作用，而對(duì)增殖沒有產(chǎn)生顯著影響，說明alphastatin可能作用于與遷移和管狀結(jié)構(gòu)形成相關(guān)的某些因