人參糖肽注射液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高.pdf

1、人參（Panax ginseng C．A．Mey．)為五加科的植物，是我們國(guó)家很珍貴的中藥材。在臨床的應(yīng)用上歷史很悠久，對(duì)高血壓、糖尿病、貧血等疾病都有很明顯療效。經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，人參中的成分包括皂苷類，糖類，揮發(fā)性成分，維生素類，蛋白質(zhì)，多肽類等等。人參糖肽注射液則是用人參根為原料，經(jīng)過(guò)精制的提取的中藥注射劑，發(fā)現(xiàn)其有補(bǔ)氣、生津、止渴等作用，臨床上還可用于氣陰兩虛型的消渴病的預(yù)防與治療，同時(shí)還能增加機(jī)體的免疫力，并且可以抑制和預(yù)防糖尿

2、病并發(fā)癥，修復(fù)胰島的功能[1-2]。人參糖肽注射液的主要活性成分是糖復(fù)合物，采用苯酚-硫酸法測(cè)定中性糖含量為2.5 mg/mL[3]，采用間羥基聯(lián)苯法測(cè)定酸性糖的含量為1.0 mg/mL[4]，采用Lowary法測(cè)定肽含量為0.3mg/mL[5]。
　　中藥中的化學(xué)成分都十分復(fù)雜，很難根據(jù)測(cè)定其中一個(gè)或幾個(gè)組分來(lái)保證藥材或制劑的質(zhì)量，近些年來(lái)，中藥指紋圖譜技術(shù)的發(fā)展和應(yīng)用，能全面地反映出中藥材中所含有的化學(xué)成分的類別與數(shù)量，從而可

3、作為控制中藥材和制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本實(shí)驗(yàn)是通過(guò)組成糖分析來(lái)建立指紋圖譜，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該產(chǎn)品的圖譜不具有指紋性，不應(yīng)該稱為指紋圖譜，應(yīng)該稱為特征圖譜，此特征圖譜同樣是按指紋圖譜的實(shí)驗(yàn)方法進(jìn)行研究的。而且糖復(fù)合物是一種天然的聚合物，它的分子結(jié)構(gòu)及其分子量的大小和分子量的分布都與生物的活性有著很密切的關(guān)系[6]，所以，測(cè)定分子量及其分布對(duì)人參糖肽注射液的質(zhì)量控制與生產(chǎn)指導(dǎo)有著同樣重要的意義。
　　本實(shí)驗(yàn)所需樣品是以人參根為原料，經(jīng)提取精

4、制可制得的人參糖肽注射液使用的原料藥及其注射劑，均由吉林百年漢克制藥有限公司提供。本實(shí)驗(yàn)主要分為兩大部分，即特征圖譜的研究與建立和人參糖肽（原料藥）的分子量及分子量分布的測(cè)定。
　　組成糖分析實(shí)驗(yàn)中對(duì)不同衍生化時(shí)間、衍生化溫度、HCL中和的用量進(jìn)行了考察，最后確定最優(yōu)衍生化條件是衍生化時(shí)間為加熱20min，衍生化溫度為70℃恒溫水浴，HCL的用量為與NaOH加入量的比值為1:1；組成糖分析方法確定是高效液相色譜法之后，對(duì)其HPLC

5、的條件也進(jìn)行了考察，如色譜柱的柱溫、不同廠家的色譜柱、流動(dòng)相、流速、洗脫梯度、波長(zhǎng)的選擇和進(jìn)樣量等色譜條件，最終確定最佳HPLC的色譜條件為：柱溫：40℃；色譜柱：Diamonsil-C18（Φ4.6 mm×250 mm）；流動(dòng)相：A：磷酸鹽緩沖液（pH6.8）：乙腈（85：15，V/V）；B：磷酸鹽緩沖液（pH6.8）：乙腈（60：40，V/V）；流速：0.9 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：250 nm。梯度洗脫：時(shí)間梯度0 min→10

6、min→30 min→40 min→50 min，相應(yīng)的濃度梯度為0(B)→8％(B)→30%(B)→30%(B)→0%(B)；進(jìn)樣體積10μL。
　　按照最佳條件對(duì)十批人參糖肽原料藥及其注射劑做特征圖譜的分析與方法學(xué)考察，應(yīng)用FP-CASE相似度計(jì)算軟件（由湖南中南大學(xué)梁逸曾教授領(lǐng)銜開發(fā)，其為藥典會(huì)認(rèn)可試用的兩個(gè)軟件之一），供試品的特征圖譜與隨行的標(biāo)準(zhǔn)品的特征圖譜經(jīng)《中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)》計(jì)算，相似度均達(dá)到≥0.9。方

7、法學(xué)考察結(jié)果顯示十批人參糖肽原料藥及注射劑經(jīng)衍生化后24h內(nèi)穩(wěn)定理想，精密度和重現(xiàn)性均可達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)。
　　通過(guò)對(duì)十批人參糖肽原料藥及其注射劑建立的特征圖譜的分析，可以為人參中藥材的質(zhì)量鑒別提供一種科學(xué)的技術(shù)與依據(jù)，也可為其它的中藥材指紋圖譜建立的提供好的借鑒。
　　分子量測(cè)定實(shí)驗(yàn)中我們分別考察了不同型號(hào)色譜柱、不同流動(dòng)相、柱溫、樣品濃度等色譜條件，最后確定最佳色譜條件為：色譜柱：用OHpak SB-802 HQ（8mm×300

8、mm）凝膠柱；流動(dòng)相：0.9%氯化鈉溶液；柱溫：35℃，樣品濃度：用OHpak SB-802 HQ（8mm×300mm）凝膠柱；0.9%氯化鈉溶液為流動(dòng)相；柱溫35℃，樣品濃度：5mg/mL。
　　按照最佳條件對(duì)十批人參糖肽原料藥做分子量及其分子量分布的分析與方法學(xué)考察，應(yīng)用龍智達(dá)GPC軟件。結(jié)果顯示本實(shí)驗(yàn)建立的糖肽分子質(zhì)量測(cè)定的方法準(zhǔn)確可行,簡(jiǎn)便快捷,精密度準(zhǔn)確，樣品重現(xiàn)性良好，可以作為完善與提高人參糖肽注射液的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供了科