人參糖肽注射液質(zhì)量標準的提高.pdf

1、人參（Panax ginseng C．A．Mey．)為五加科的植物，是我們國家很珍貴的中藥材。在臨床的應用上歷史很悠久，對高血壓、糖尿病、貧血等疾病都有很明顯療效。經(jīng)實驗研究發(fā)現(xiàn)，人參中的成分包括皂苷類，糖類，揮發(fā)性成分，維生素類，蛋白質(zhì)，多肽類等等。人參糖肽注射液則是用人參根為原料，經(jīng)過精制的提取的中藥注射劑，發(fā)現(xiàn)其有補氣、生津、止渴等作用，臨床上還可用于氣陰兩虛型的消渴病的預防與治療，同時還能增加機體的免疫力，并且可以抑制和預防糖尿

2、病并發(fā)癥，修復胰島的功能[1-2]。人參糖肽注射液的主要活性成分是糖復合物，采用苯酚-硫酸法測定中性糖含量為2.5 mg/mL[3]，采用間羥基聯(lián)苯法測定酸性糖的含量為1.0 mg/mL[4]，采用Lowary法測定肽含量為0.3mg/mL[5]。
　　中藥中的化學成分都十分復雜，很難根據(jù)測定其中一個或幾個組分來保證藥材或制劑的質(zhì)量，近些年來，中藥指紋圖譜技術的發(fā)展和應用，能全面地反映出中藥材中所含有的化學成分的類別與數(shù)量，從而可

3、作為控制中藥材和制劑的質(zhì)量標準。本實驗是通過組成糖分析來建立指紋圖譜，實驗結(jié)果顯示，該產(chǎn)品的圖譜不具有指紋性，不應該稱為指紋圖譜，應該稱為特征圖譜，此特征圖譜同樣是按指紋圖譜的實驗方法進行研究的。而且糖復合物是一種天然的聚合物，它的分子結(jié)構(gòu)及其分子量的大小和分子量的分布都與生物的活性有著很密切的關系[6]，所以，測定分子量及其分布對人參糖肽注射液的質(zhì)量控制與生產(chǎn)指導有著同樣重要的意義。
　　本實驗所需樣品是以人參根為原料，經(jīng)提取精

4、制可制得的人參糖肽注射液使用的原料藥及其注射劑，均由吉林百年漢克制藥有限公司提供。本實驗主要分為兩大部分，即特征圖譜的研究與建立和人參糖肽（原料藥）的分子量及分子量分布的測定。
　　組成糖分析實驗中對不同衍生化時間、衍生化溫度、HCL中和的用量進行了考察，最后確定最優(yōu)衍生化條件是衍生化時間為加熱20min，衍生化溫度為70℃恒溫水浴，HCL的用量為與NaOH加入量的比值為1:1；組成糖分析方法確定是高效液相色譜法之后，對其HPLC

5、的條件也進行了考察，如色譜柱的柱溫、不同廠家的色譜柱、流動相、流速、洗脫梯度、波長的選擇和進樣量等色譜條件，最終確定最佳HPLC的色譜條件為：柱溫：40℃；色譜柱：Diamonsil-C18（Φ4.6 mm×250 mm）；流動相：A：磷酸鹽緩沖液（pH6.8）：乙腈（85：15，V/V）；B：磷酸鹽緩沖液（pH6.8）：乙腈（60：40，V/V）；流速：0.9 mL/min；檢測波長：250 nm。梯度洗脫：時間梯度0 min→10

6、min→30 min→40 min→50 min，相應的濃度梯度為0(B)→8％(B)→30%(B)→30%(B)→0%(B)；進樣體積10μL。
　　按照最佳條件對十批人參糖肽原料藥及其注射劑做特征圖譜的分析與方法學考察，應用FP-CASE相似度計算軟件（由湖南中南大學梁逸曾教授領銜開發(fā)，其為藥典會認可試用的兩個軟件之一），供試品的特征圖譜與隨行的標準品的特征圖譜經(jīng)《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》計算，相似度均達到≥0.9。方

7、法學考察結(jié)果顯示十批人參糖肽原料藥及注射劑經(jīng)衍生化后24h內(nèi)穩(wěn)定理想，精密度和重現(xiàn)性均可達到標準。
　　通過對十批人參糖肽原料藥及其注射劑建立的特征圖譜的分析，可以為人參中藥材的質(zhì)量鑒別提供一種科學的技術與依據(jù)，也可為其它的中藥材指紋圖譜建立的提供好的借鑒。
　　分子量測定實驗中我們分別考察了不同型號色譜柱、不同流動相、柱溫、樣品濃度等色譜條件，最后確定最佳色譜條件為：色譜柱：用OHpak SB-802 HQ（8mm×300

8、mm）凝膠柱；流動相：0.9%氯化鈉溶液；柱溫：35℃，樣品濃度：用OHpak SB-802 HQ（8mm×300mm）凝膠柱；0.9%氯化鈉溶液為流動相；柱溫35℃，樣品濃度：5mg/mL。
　　按照最佳條件對十批人參糖肽原料藥做分子量及其分子量分布的分析與方法學考察，應用龍智達GPC軟件。結(jié)果顯示本實驗建立的糖肽分子質(zhì)量測定的方法準確可行,簡便快捷,精密度準確，樣品重現(xiàn)性良好，可以作為完善與提高人參糖肽注射液的質(zhì)量標準提供了科