薄芝糖肽注射液質量標準和檢測方法的研究.pdf

1、目的:多糖及多肽類的大分子藥物受到人們越來越多的研究和關注，然而其質量控制還處于比較低的水平，現(xiàn)行的質量標準不能全面的反映和控制藥品的質量。本課題選取薄芝糖肽注射液作為研究對象，對其成分及結構組成進行相關研究，為這種藥物的質量標準提高提供相關研究基礎，也可以為這類藥物的進一步研究開發(fā)和質量控制提供參考。
　　方法:本課題主要對薄芝糖肽注射液進行了以下幾方面的研究。
　　1.采用離子色譜法對薄芝糖肽注射液的單糖組成及游離糖進行

2、研究。以CarboPac PA10(4×250mm)為分析柱，CarboPac PA10(4×50mm)為保護柱;淋洗液經過優(yōu)化后采用28mmol/L KOH溶液（淋洗液發(fā)生器自動生成，充氮氣保護），在流速0.8mL/min，柱溫30℃的條件下進行測定，安培檢測器采用積分脈沖檢測。
　　2.采用一些簡單的化學方法和波譜方法對薄芝糖肽注射液的成分及可能的結構進行分析。用硫酸蒽酮法和硫酸苯酚法測定多糖的含量;福林酚法測定多肽的含量;借

3、助紫外分光光度計，通過β-消除反應判斷糖肽的連接方式，以及高碘酸氧化判斷糖苷鍵的類型。
　　3.建立柱前AQC衍生-高效液相色譜法測定薄芝糖肽注射液里水解之后的氨基酸和游離氨基酸的方法。內標選用α-氨基丁酸，柱前衍生化試劑選用6-氨基喹啉基-N-羥基琥珀酰亞氨基甲酸酯(AQC)，色譜柱使用Kromasil C18柱(250mm×4.6mm，5μm)，緩沖液選用140mmol/L乙酸銨(pH5.00)和60％乙腈溶液為流動相，按照一

4、定的梯度進行洗脫，檢測波長選用248nm。
　　4.建立薄芝糖肽注射液的高效液相色譜(HPLC)指紋圖譜。色譜柱選擇XBridgeTM C18（4.6mm×250mm，5μm），水溶液作為流動相A，乙腈溶液作為流動相B，按照一定的梯度進行洗脫，檢測波長選用210nm，柱溫采用30℃，進樣量為20μL，流速選擇1.0mL/min。
　　按照標準計算不同批次的薄芝糖肽注射液之間的相似度。
　　結果:
　　1.在建立的

5、離子色譜條件下，兩種糖醇和六種單糖組分可以獲得較好分離，且薄芝糖肽注射液中含有甘露醇、葡萄糖，少量的鼠李糖、阿拉伯糖以及微量的巖藻糖。
　　2.實驗結果表明，薄芝糖肽注射液中多糖含量為1.23～2.38mg/mL，多肽含量為0.17～0.31mg/mL，糖肽的連接方式為O-型糖肽鍵，糖苷鍵的類型為1→2和1→6糖苷鍵。
　　3.用建立的柱前衍生-高效液相色譜法測定了薄芝糖肽注射液中17種游離氨基酸和水解后氨基酸的含量。

6、>　　4.薄芝糖肽注射液的HPLC指紋圖譜標示出7個共有峰，結果顯示，10批被測樣品的色譜指紋圖譜的整體相似度在0.954以上。
　　結論:建立的測定單糖組成的離子色譜法專屬性好，靈敏度高，適合于薄芝糖肽注射液中的單糖組成測定。薄芝糖肽化學成分測定研究，有助于深入開展薄芝糖肽質量標準研究和提高質量控制水平。建立的柱前衍生色譜法能夠很好的分離與測定18種常見氨基酸，建立的方法符合方法學驗證要求，適用于薄芝糖肽注射液中的氨基酸定量測定