腺苷信號(hào)通路在大鼠單側(cè)輸尿管梗阻后腎纖維化作用機(jī)制研究.pdf

1、目的:缺血和缺氧是導(dǎo)致慢性腎臟疾病的重要原因。腺苷作為缺血、缺氧性腎臟纖維化的重要信號(hào)分子，也可能是慢性腎臟疾病的一個(gè)重要致病因子。本研究檢測(cè)了單側(cè)輸尿管梗阻后腎臟腺苷濃度的變化及其相關(guān)致纖維化因子的表達(dá)，探索了腺苷信號(hào)通路與腎纖維化的相關(guān)性，旨在進(jìn)一步闡述慢性腎臟發(fā)病機(jī)制。
　　方法:選擇清潔級(jí)健康雄性SD大鼠32只，隨機(jī)分為兩組:假手術(shù)組（對(duì)照組）和單側(cè)輸尿管梗阻組（UUO組），每組各16只，分別于手術(shù)后第1、2、3、4周分批

2、處死前抽血，處死后取腎臟樣本，每個(gè)時(shí)間點(diǎn)在兩組中各取4只。分別用蘇木素伊紅（HE）、Masson染色觀察各時(shí)間點(diǎn)大鼠腎組織病理變化以及腎間質(zhì)膠原纖維沉積情況，應(yīng)用圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行半定量分析。采用高效液相色譜法(HPLC)檢測(cè)腎組織腺苷水平，Elisa測(cè)定試劑盒檢測(cè)血肌酐水平，實(shí)時(shí)定量PCR測(cè)定腎間質(zhì)TGF-β1和Ⅰ型前膠原基因mRNA的表達(dá)量，免疫組織化學(xué)方法測(cè)定腎間質(zhì)TGF-β1的蛋白表達(dá)，圖像分析系統(tǒng)對(duì)免疫組化結(jié)果進(jìn)行半定量分析。<

3、br>　　結(jié)果:1、單側(cè)輸尿管梗阻后，實(shí)驗(yàn)組腺苷濃度相比對(duì)照組顯著升高（P＜0.05），并且在實(shí)驗(yàn)后第一周達(dá)到高峰(P＜0.01)，H&E和Masson染色結(jié)果顯示隨著腺苷濃度顯著增加，腎單位破壞逐漸增多，腎間質(zhì)膠原沉積逐漸增加。2、在單側(cè)輸尿管梗阻后的四個(gè)時(shí)間點(diǎn)，未見血肌酐水平顯著(P＞0.05)增加。3、實(shí)時(shí)PCR數(shù)據(jù)和免疫組化分析顯示，在單側(cè)輸尿管梗阻后的四個(gè)時(shí)間點(diǎn)的TGF-β1和Ⅰ型前膠原的mRNA顯著增加（P＜0.05），免疫

4、組化分析表明在UUO后第二周，其在腎小管上皮細(xì)胞表達(dá)最多，然后隨著時(shí)間推移，其表達(dá)逐漸下降，并且隨著UUO時(shí)間的延長(zhǎng)，TGF-β1的分布從腎小管上皮細(xì)胞向腎間質(zhì)轉(zhuǎn)移，進(jìn)而蔓延至腎小球。
　　結(jié)論:1、腎間質(zhì)纖維化過(guò)程中可能存在腎組織持續(xù)低氧，并導(dǎo)致組織內(nèi)腺苷水平升高;2、腺苷含量增高，加速了腎小管損傷、腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生、發(fā)展;3、腺苷信號(hào)通路可能通過(guò)調(diào)節(jié)TGF-β1、α1(Ⅰ)procollagen mRNA表達(dá)，干預(yù)RIF的發(fā)