復(fù)方腸泰抑制大腸癌的作用及機(jī)理初探.pdf

1、大腸癌(ColorectalCancer，CRC)是世界范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一。本文通過整體動(dòng)物和體外細(xì)胞生物學(xué)實(shí)驗(yàn)，從整體動(dòng)物、組織器官、細(xì)胞和分子生物學(xué)的不同水平，觀察復(fù)方腸泰(FFCT)對人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480裸鼠種植瘤的抑制作用；對人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480細(xì)胞增殖的抑制作用，對其細(xì)胞周期、凋亡以及凋亡作用途徑進(jìn)行初步探索；并探索了對H22荷瘤小鼠免疫功能的影響。 本文的實(shí)驗(yàn)方法如下：通過FFCT對人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480

2、體外生長的影響以及裸鼠接種SW480瘤株后的體內(nèi)抑瘤作用，進(jìn)行體內(nèi)外的抗腫瘤藥效作用研究，并對FFCT的臨床處方進(jìn)行篩選；采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法測定不同濃度FFCT在不同作用時(shí)間內(nèi)對體外培養(yǎng)的SW480細(xì)胞增殖的影響，同時(shí)應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測其對細(xì)胞增殖周期及凋亡的影響；檢測經(jīng)不同濃度的FFCT作用后SW480結(jié)腸癌細(xì)胞內(nèi)caspase-3的活性，比較經(jīng)FFCT作用以及同時(shí)經(jīng)FFCT和caspase-3抑制劑Ac—DEVD—CHO作用

3、后，體外培養(yǎng)的人結(jié)腸癌SW480細(xì)胞凋亡的影響；檢測FFCT對H22荷瘤小鼠瘤重、免疫器官濕重以及溶血素抗體生成的影響。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：“五號處方”的FFCT能夠顯著抑制人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的增殖；抑制SW480裸鼠種植瘤的瘤重，且裸鼠的體重均未見明顯減輕，未見化學(xué)藥常見的毒性作用。FFCT“處方五”的體內(nèi)外抑瘤作用優(yōu)于其它4個(gè)處方。FFTC可在G0/G1期以及G2/M期阻滯人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的增殖，使S期的活細(xì)胞比率降低

4、；在一定范圍內(nèi)，F(xiàn)FCT的濃度越高、作用時(shí)間越長，對腫瘤細(xì)胞生長的抑制作用越強(qiáng)，凋亡率也越高。經(jīng)FFCT培養(yǎng)液分別作用不同時(shí)間后的caspase-3酶活性，與對照組相比均有顯著性變化，呈現(xiàn)出先增高活性，隨后逐漸降低的趨勢；加入caspase-3抑制劑Ac—DEVD—CHO的FFCT各濃度、時(shí)間組結(jié)腸癌細(xì)胞SW480的早期凋亡率均有所增加，細(xì)胞的壞死率與晚期凋亡率的總和也有所增加，與空白組比較且呈一定的量—效、時(shí)—效關(guān)系，但是與沒有加入A

5、c—DEVD—CHO時(shí)相比，各濃度、時(shí)間組的SW480早期凋亡率均有所下降，細(xì)胞的壞死率與晚期凋亡率的總和沒有顯著性變化。FFCT與抗腫瘤藥物環(huán)磷酰胺(Cy)有一定的協(xié)同作用，抑制瘤重增長；能明顯改善Cy化療后H22荷瘤小鼠的脾臟、胸腺等臟器的萎縮，提高胸腺和脾臟的臟器系數(shù)，使因化療引起的機(jī)體免疫功能低下有一定的恢復(fù)，并且能夠升高H22荷瘤小鼠血清溶血素水平，使Cy所致的血清溶血素含量下降有明顯恢復(fù)，從而可提高H22荷瘤小鼠的體液免疫能