常用中成藥對細(xì)胞色素P450 3A4和P-糖蛋白的誘導(dǎo)研究.pdf

1、由于中藥制劑多長期和反復(fù)的用藥，許多CYP450代謝酶和轉(zhuǎn)運(yùn)體活性可被誘導(dǎo)，臨床常常引起藥物相互作用，為了預(yù)防這類相互作用，我們擬考察常用中藥對人肝臟中最主要的代謝酶CYP3A4和腸道中主要的藥物轉(zhuǎn)運(yùn)體P-糖蛋白的誘導(dǎo)作用。
　　 本文用待測藥物與HepG2細(xì)胞共培養(yǎng)48小時(shí)后與CYP3A探針?biāo)幬镞溥_(dá)唑侖共孵育，通過測定1-羥基咪達(dá)唑侖的生成速率，來比較藥物刺激組和空白組的CYP3A4酶的相對活性，從而用于快速的預(yù)測藥物的誘導(dǎo)作

2、用。同時(shí)用real-time PCR法考察了篩選出的有誘導(dǎo)作用的藥物刺激HepG2細(xì)胞48h后的CYP3A4的表達(dá)量的改變。我們用陽性誘導(dǎo)劑利福平對該篩選體系進(jìn)行了檢驗(yàn)，結(jié)果顯示，利福平使HepG2細(xì)胞的CYP3A4酶活性增加1.97倍，使HepG2細(xì)胞中CYP3A4基因表達(dá)量增加2.3倍。進(jìn)而我們考察了痰熱清注射液等33種臨床常用或者長期服用的中藥制劑，結(jié)果發(fā)現(xiàn)麝香保心丸、肝蘇顆粒和強(qiáng)肝膠囊對CYP3A4的酶活性影響較強(qiáng)，其中麝香保心

3、丸的誘導(dǎo)作用最強(qiáng)。
　　 為了進(jìn)一步驗(yàn)證該篩選體系的可靠性，我們對麝香保心丸進(jìn)行了體內(nèi)和體外的考察，體外HepG2細(xì)胞結(jié)果顯示利福平和麝香保心丸對HepG2細(xì)胞的CYP3A4酶活性和表達(dá)都呈現(xiàn)劑量依賴的誘導(dǎo)關(guān)系。經(jīng)過6天連續(xù)灌胃給予麝香保心丸(6.75mg/kg)的Wistar大鼠的肝微粒體活性比空白組增加了1.57倍，CYP3A1和CYP3A2基因表達(dá)分別增加了1.40和2.31倍，說明該篩選體系可用于CYP3A4誘導(dǎo)作用的篩

4、選。鑒于此，我們用HepG2細(xì)胞篩選體系進(jìn)一步探索麝香保心丸誘導(dǎo)作用的活性成分，我們選取了麝香酮、睪丸酮、龍腦、肉桂醛、人參皂苷Rgl、人參皂苷Rf、人生皂苷Re、蟾毒靈、華蟾毒配基、酯蟾毒配基10種主要成分進(jìn)行體外研究。結(jié)果顯示，在麝香保心丸含量換算的劑量下，華蟾毒配基(0.03μg/mL)和蟾毒靈(0.01μg/mL)有一定的誘導(dǎo)作用，酶活性分別為空白組的1.14和1.58倍。當(dāng)華蟾毒配基和蟾毒靈孵育濃度提高，誘導(dǎo)作用也增加。麝香酮

5、曾經(jīng)被報(bào)道對大鼠的CYP3A有誘導(dǎo)作用，但是在本課題的研究中，10-30μg/mL濃度的麝香酮與細(xì)胞孵育后顯示誘導(dǎo)作用，在含量換算的濃度(0.3μg/mL)下與細(xì)胞共孵育48h對細(xì)胞的CYP3A4沒有誘導(dǎo)作用，其他的單體在測試的濃度下都未顯示出誘導(dǎo)作用。提示我們在麝香保心丸的誘導(dǎo)現(xiàn)象中，華蟾毒配基、酯蟾毒配基和蟾毒靈可能在麝香保心丸的誘導(dǎo)作用中起主要的作用，并且他們的結(jié)構(gòu)很相似，很可能有協(xié)同的作用。因此在合用含有華蟾毒配基、酯蟾毒配基、

6、蟾毒靈的藥物與經(jīng)過CYP3A代謝的藥物時(shí)可能產(chǎn)生藥物間的相互作用。
　　 在本課題的研究中還使用Caco-2細(xì)胞Transwell模型考察了麝香保心丸對P-糖蛋白的誘導(dǎo)作用，首先我們用陽性誘導(dǎo)劑B[a]P對模型進(jìn)行了評價(jià)，進(jìn)而考察了麝香保心丸(30、20、10μg/mL)與Caco-2細(xì)胞單層共孵育72小時(shí)后羅丹明-123的轉(zhuǎn)運(yùn)率，結(jié)果顯示麝香保心丸的誘導(dǎo)作用不明顯，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。然而Caco-2細(xì)胞與麝香保心丸(20、10