SARS-CoV N蛋白與細(xì)胞色素P450（CYP4F3）相互作用的研究.pdf

1、N蛋白是SARS冠狀病毒(SARS．CoV)的主要結(jié)構(gòu)蛋白之一，與病毒RNA結(jié)合形成核衣殼，能夠誘導(dǎo)強(qiáng)烈的細(xì)胞免疫和體液免疫，是SARS冠狀病毒主要的抗原分子，在SARS的診斷和預(yù)防上具有重要的應(yīng)用。已有的研究表明，SARS-CoV N蛋白參與SARS冠狀病毒RNA合成的調(diào)控以及核衣殼的形成，并能結(jié)合人親環(huán)素(hCypA)解離病毒核心，激活A(yù)P-1信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑，導(dǎo)致蛋白質(zhì)類泛素化，從而干擾宿主細(xì)胞分裂，在生長(zhǎng)因子缺乏的情況下誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡

2、。在我們的前期工作中，發(fā)現(xiàn)將表達(dá)N蛋白的質(zhì)粒和表達(dá)S蛋白的質(zhì)粒共同免疫家兔后，家兔的SARS樣炎癥反應(yīng)比單注射表達(dá)S蛋白質(zhì)粒明顯加重，提示N蛋白在SARS的發(fā)病中有增強(qiáng)炎癥反應(yīng)的作用。 為了研究N蛋白參與炎癥反應(yīng)的分子機(jī)理，以全長(zhǎng)SARS-CoY N蛋白為誘餌蛋白，利用酵母雙雜交篩選人胎肝cDNA文庫(kù)時(shí)，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞色素P450(CYP4F3)有可能與SARS-CoV N蛋白相互作用。本研究通過一系列免疫沉淀、免疫印跡以及體外結(jié)合、

3、BIACORE等實(shí)驗(yàn)證明，CYP4F3與SARS-CoV N蛋白在體內(nèi)外均能直接結(jié)合形成復(fù)合物，CYP4F3與SAPS-CoVN蛋白的N端和C端均有結(jié)合，兩種蛋白的親和常數(shù)K<,D>=4.3×10<'-11>，大于抗原一抗體的親和力(抗原-抗體的親和常數(shù)大約為10<'-10>)。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)，SARS-CoY N蛋白與CYP4F3結(jié)合可以抑制CYP4F3的ω-羥化酶活性，從而抑制炎癥因子LTB<,4>的降解。另外，還對(duì)臨床SARS病