SARS-CoV N蛋白與細胞色素P450（CYP4F3）相互作用的研究.pdf

1、N蛋白是SARS冠狀病毒(SARS．CoV)的主要結構蛋白之一，與病毒RNA結合形成核衣殼，能夠誘導強烈的細胞免疫和體液免疫，是SARS冠狀病毒主要的抗原分子，在SARS的診斷和預防上具有重要的應用。已有的研究表明，SARS-CoV N蛋白參與SARS冠狀病毒RNA合成的調控以及核衣殼的形成，并能結合人親環(huán)素(hCypA)解離病毒核心，激活AP-1信號轉導途徑，導致蛋白質類泛素化，從而干擾宿主細胞分裂，在生長因子缺乏的情況下誘導細胞凋亡

2、。在我們的前期工作中，發(fā)現(xiàn)將表達N蛋白的質粒和表達S蛋白的質粒共同免疫家兔后，家兔的SARS樣炎癥反應比單注射表達S蛋白質粒明顯加重，提示N蛋白在SARS的發(fā)病中有增強炎癥反應的作用。 為了研究N蛋白參與炎癥反應的分子機理，以全長SARS-CoY N蛋白為誘餌蛋白，利用酵母雙雜交篩選人胎肝cDNA文庫時，發(fā)現(xiàn)細胞色素P450(CYP4F3)有可能與SARS-CoV N蛋白相互作用。本研究通過一系列免疫沉淀、免疫印跡以及體外結合、

3、BIACORE等實驗證明，CYP4F3與SARS-CoV N蛋白在體內外均能直接結合形成復合物，CYP4F3與SAPS-CoVN蛋白的N端和C端均有結合，兩種蛋白的親和常數(shù)K<,D>=4.3×10<'-11>，大于抗原一抗體的親和力(抗原-抗體的親和常數(shù)大約為10<'-10>)。進一步的研究發(fā)現(xiàn)，SARS-CoY N蛋白與CYP4F3結合可以抑制CYP4F3的ω-羥化酶活性，從而抑制炎癥因子LTB<,4>的降解。另外，還對臨床SARS病