他克莫司通過CaN-NO通路抑制人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞增殖及向成骨細(xì)胞分化.pdf

1、目的：探討免疫抑制劑他克莫司(Tacrolimus，F(xiàn)K506)對原代人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞(Human Bone Marrow-derived Mesenchymal StemCells，HBMSCs)的增殖及向成骨細(xì)胞分化的影響及其作用機(jī)制。 研究方法：建立原代HBMSCs體外模型，在無酚紅α-MEM培養(yǎng)基(含10％經(jīng)葡聚糖包被炭末吸附的血清)中加入β-甘油磷酸(β-glycerophosphate，β-GP)、抗壞血酸(Anti

2、scorbic acid)和地塞米松(Methylprednisolone)，誘導(dǎo)HBMSCs向成骨細(xì)胞分化。觀察不同濃度的FK506對HBMSCs的增殖及向成骨細(xì)胞分化的影響；并分別合用雌二醇(Estradiol，E2)或白藜蘆醇(Resveratrol,RSVL)，探討FK506作用于HBMSCs的分子機(jī)制。測定5-溴脫氧尿核苷(Bromodeoxyuridine，BrdU)摻入率，反映細(xì)胞DNA合成即增殖情況；測定細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶

3、活性(Alkaline phosphatase，ALP)與鈣沉積量，反映HBMSCs向成骨細(xì)胞分化的情況；用Western Blot蛋白印跡法反映RUNX2/Cbfal表達(dá)的情況。用一氧化氮(Nitric oxide，NO)試劑盒及鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(Calcineurin，CaN)試劑盒測定NO產(chǎn)量及CaN活性的變化。 結(jié)果：他克莫司(0.01～2.5μmol.L<'-1>)呈劑量依賴性地抑制HBMSCs的一氧化氮的產(chǎn)量，并表現(xiàn)為

4、5-溴脫氧尿核苷摻入率顯著降低，細(xì)胞堿性磷酸酶活性及鈣沉積量明顯減少。1μmol.L<'-1>的他克莫司除以上作用外，還表現(xiàn)為顯著抑制HBMSCs的CaN活性，細(xì)胞內(nèi)成骨細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子RUNX2/Cbfal表達(dá)明顯降低。且他克莫司(1μmol.L<'-1>)對HBMSCs向成骨細(xì)胞的分化的抑制作用不能被NO促進(jìn)劑雌二醇(0.01μmol.L<'-1>)及及白藜蘆醇(1μmol.L<'-1>)所逆轉(zhuǎn)。 結(jié)論：他克莫司呈劑量依賴