血管內(nèi)皮祖細(xì)胞促進(jìn)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向成骨細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　為探討血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelial progenitor cells，EPCs)在骨缺損修復(fù)重建中的作用機(jī)制，本研究通過(guò)分離、培養(yǎng)、鑒定大鼠骨髓源的EPCs、BMSCs，并建立EPCs與BMSCs非接觸式同培養(yǎng)體系以研究EPCs對(duì)向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)的BMSCs的生物學(xué)行為的影響。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)大鼠骨髓來(lái)源的血管內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bonemarrow mesenchy

2、mal stem cells，BMSCs)，對(duì)EPCs、BMSCs進(jìn)行鑒定。成骨誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)BMSCs向成骨細(xì)胞分化，利用Transwell小室(孔徑0.4μ m)將EPCs與誘導(dǎo)成骨的BMSCs按1∶1比例進(jìn)行非接觸式同培養(yǎng)，建立實(shí)驗(yàn)組（單純誘導(dǎo)成骨的BMSCs為對(duì)照組），研究EPCs對(duì)BMSCs存活、分化等生物學(xué)行為的影響，并通過(guò)CCK-8（Cell Counting Kit-8）試劑盒檢測(cè)EPCs對(duì)BMSCs細(xì)胞存活的影響。RT-P

3、CR檢測(cè)EPCs-BMSCs共培養(yǎng)組中，BMSCs向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)后堿性磷酸酶(ALP)、骨鈣素(OC)、Ⅰ型膠原基因(ColⅠ)基因的表達(dá)，從而檢測(cè)EPCs對(duì)BMSCs向成骨細(xì)胞誘導(dǎo)中是否有促進(jìn)作用。
　　結(jié)果：
　　1、CCK-8檢測(cè)結(jié)果表明，培養(yǎng)72h后EPCs-BMSCs共培養(yǎng)組的吸光度OD值要顯著高于對(duì)照組（BMSCs單接種）。
　　2、RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，EPCs-BMSCs共培養(yǎng)組中BMSCs的堿性磷