家禽土霉素蓄積性毒性試驗與HPLC殘留分析研究.pdf

1、土霉素(Oxytetracycline)是1950年發(fā)現(xiàn)的廣譜抗菌素。對革蘭氏陽性菌、陰性菌、螺旋體、衣原體等均有抑制作用，國內(nèi)外獸醫(yī)臨床上廣泛用作豬、牛、雞、鴨等動物的抗菌藥，也常添加入飼料預防疾病的發(fā)生。山于長期廣泛應用，細菌產(chǎn)生抗藥性，使用劑量不斷提高。又由于大劑量濫用，使畜禽組織中殘留量不斷增高，被人們食用后帶來極大危害。國內(nèi)外早已報道可引起“二重感染”，骨髂牙齒變黃，胎兒死亡。長期毒害還可造成致畸、致癌。 國內(nèi)外對土霉

2、素殘留的研究，多數(shù)停留在單一的分析方法，或“二重感染”、“四環(huán)素黃牙”等臨床病癥上，而土霉素對人畜毒性和快速檢測的系統(tǒng)研究報道甚少。本試驗結(jié)合我攻讀的碩士方向“動物性食品安全與檢驗”，設(shè)計以4周齡雞作1個月土霉素蓄積性毒性試驗，系統(tǒng)研究試驗動物口服土霉素不同劑量后所表現(xiàn)的生產(chǎn)性能、生前癥狀，剖檢變化，組織學切片、血液生化指標和用現(xiàn)代最先進的儀器高效液相色譜儀(HPLC)檢測組織中土霉素殘留。然后再以2周齡肉鴨投藥1個月作重復試驗，對土霉

3、素的毒性、毒性機理、靶器官進行探索，并對土霉素的吸收、分布、排泄、降解作進一步研究，為生產(chǎn)上及時檢出土霉素殘留超標的畜禽產(chǎn)品和早期防止土霉素殘留超標提供科學依據(jù)。 雞蓄積性毒性試驗結(jié)果：從本地雞場購回未接觸過任何藥物的2周齡雜交雞100只，飼喂自己加工未添加任何藥物的配合飼料。經(jīng)預防接種，喂養(yǎng)2周產(chǎn)生抗體后，又從中選擇20只隨機分為四個組：0組(對照組)、試驗Ⅰ組(低劑量)、Ⅱ組(中劑量)和Ⅲ組(高劑量)，每組5只。按照設(shè)計劑量

4、給每個組每只雞口服投藥12.5mg、25mg、50mg，以后隨體重增加每周增加1倍劑量。投藥后表現(xiàn)的變化：①生前癥狀：第4天Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ組雞陸續(xù)出現(xiàn)精神差、食欲減退、嗜睡。第7天、8天第Ⅲ組雞接連死亡2只，第12天第Ⅱ組死亡1只，第14天Ⅰ組死亡一只。其他雞精神沉郁，食欲減半或廢絕，臥地不起，眼半閉或全閉，雞冠和面部蒼白，排稀便。②剖檢變化：及時剖檢自然死亡雞和投藥1個月宰殺試驗雞，死雞肝臟嚴重腫大。為正常肝臟的1.5～2倍，肝邊緣鈍園，

5、顏色變黃褐色，有明顯出血點，易碎有油膩感。腎腫大1.2～1.5倍，紅褐色，有出血點，易碎。心臟稍腫大，心包積液。肌肉纖維水腫，骨骼略黃。其他試驗雞呈相同性質(zhì)不同程度病理變化。③組縱切片檢查：以肝臟、腎臟的變性壞死為主要特征，肝小葉細胞排列十分紊亂，細胞內(nèi)充滿大小空泡使肝組織呈網(wǎng)狀樣變，細胞間有紅血球浸潤。肝細胞核濃縮、碎裂和消失，中央靜脈淤血。腎小管細胞明顯壞死，大量脫落于管腔中，腎小球細胞腫大。④血液生化指標：反應肝臟、腎臟和心臟損害

6、的指標都增高。肝功指標谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ACT)為5～7IU/L(0組為3IU/L)，谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)為232～249IU/L(0組為229IU/L)、乳酸脫氫酶(LDII)為693～885IU/L(0組為624IU/L)，堿性磷酸酶(SKP)為510～770IU/L(0組為470IU/L)。反應腎臟損害指標：血清肌酐(CREA)為116～139IU/L(0組為73IU/L)。反應心臟損害的指標：α-羥丁酸脫氫酶(HBDH)為788～10

7、66IU/L(0組為670IU/L)。檢測早期癌變生化指標甲胎抗原(AFP)和癌胚抗原(CEA)均為陰性。⑤HPLC檢測雞組織中殘留：肌肉0組、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組分別為0、0.1、0.3、1.5、0.04(mg/kg)。雞肝臟：0組、Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ組分別為0、0.2、0.4、1.6、0.05(mg/kg)。說明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ三個組肌肉、肝臟的殘留量均超過NY5034-2001標準。第Ⅳ組(降解組)雞經(jīng)2周降解，殘留量已明顯低于NY5034-2

8、001值。從上述結(jié)果雞呈明顯藥物中毒表現(xiàn)，也反應了土霉素的毒性特點。 鴨蓄積性毒性試驗——土霉素殘留重復試驗：為了驗證雞蓄積性毒性試驗各項結(jié)果的可靠性，選用2周齡天府肉鴨20只，完全按照雞試驗方案分組，預防接種、飼養(yǎng)、口服土霉素，試驗1個月。觀察肉鴨的生前癥狀，剖檢變化，組織學切片，血漿生化指標和用HPLC檢測鴨組織中的土霉素殘留。 鴨試驗結(jié)果表明，上述各項試驗與雞蓄積性毒性試驗完全重復。不過鴨生前癥狀比雞輕微，未發(fā)生死