土霉素脅迫下半滑舌鰨腸道耐藥菌與藥物殘留的量效研究.pdf

1、為了研究半滑舌鰨腸道耐藥性和體內(nèi)藥物殘留的量效關(guān)系，本文模擬水產(chǎn)養(yǎng)殖實際，在海水溫度為(22±1)℃下，以半滑舌鰨為養(yǎng)殖對象，以125mg/(kg·d)劑量拌料投喂土霉素(Oxytetracycline，OTC)11天，在投藥期和投藥后32天內(nèi)，利用選擇培養(yǎng)基檢測其腸道細菌和弧菌耐藥率，并繪制其隨時間的變化規(guī)律，研究腸道細菌在土霉素的脅迫條件下耐藥性反應(yīng)；同時用HPLC檢測其肌肉，血清和肝臟三種組織中土霉素殘留量，為安全合理用藥，預(yù)測休

2、藥期提供幫助；最后將耐藥率的變化規(guī)律和不同組織的藥時曲線擬合，尋找耐藥率和殘留量的相互關(guān)系。為水產(chǎn)動物飼養(yǎng)過程中，藥物殘留檢測探索一種提供新的研究思路。 (1)腸道細菌計數(shù)培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中土霉素劑量的確定通過對不同培養(yǎng)基檢測腸菌數(shù)量，并對菌數(shù)穩(wěn)定性和平行性分析，最終選擇海水營養(yǎng)瓊脂(MNA)和海水TCBS(MTCBS)兩種培養(yǎng)基作為海水和腸道細菌和弧菌計數(shù)的理想培養(yǎng)基，在后續(xù)實驗中使用。 在MNA和MTCBS兩種培養(yǎng)

3、基中，分別添加三種質(zhì)量濃度16μg/ml、80μg/ml和160μg/ml的OTC，制成三種不同耐藥等級的選擇培養(yǎng)基，檢測魚腸道中細菌和弧菌的耐藥率。發(fā)現(xiàn)三種等級耐藥率分散性良好，并與質(zhì)量濃度線性關(guān)系好。因此在后續(xù)實驗中選擇16、80和160μg/ml三種質(zhì)量濃度的OTC作為耐藥率選擇培養(yǎng)基的添加劑量。 (2)OTC對半滑舌鰨腸道細菌和弧菌耐藥性的影響將三種OTC質(zhì)量濃度16、80和160μg/ml，分別添加到MNA和MTCBS

4、中，作為細菌和弧菌的低、中和高不同耐藥性等級(強度)的選擇培養(yǎng)基，對半滑舌鰨養(yǎng)殖中腸道細菌和弧菌耐藥強度檢測，發(fā)現(xiàn)腸道菌群耐藥率發(fā)生了較大的變化。綜合分析可以得出如下結(jié)論： ①在實驗期間，半滑舌鰨腸道細菌和弧菌耐藥率變化曲線基本呈現(xiàn)先增加后減少的變化趨勢：在投藥期間迅速上升，并在投藥期最后一天達到最大值，停藥后失去了外界藥物選擇壓力，耐藥率逐步接近或者降低至對照組水平。 ②同一耐藥率等級的兩種培養(yǎng)基中，弧菌的耐藥率比細菌

5、的耐藥率大。腸道細菌和弧菌耐藥率都隨著培養(yǎng)基中添加OTC質(zhì)量濃度的升高而降低。因此，在投藥期的最后一天，6種耐藥率隨時間變化曲線中，耐藥率同時達到最大值。其中腸道弧菌的低耐藥性耐藥率達到最高值(75.23±3.39)％，而腸道細菌低耐藥性耐藥率為最低值(18.64±2.70)％。 ③在休藥期后期，除了低耐藥性弧菌耐藥率降低到對照組水平外，其余的耐藥率仍然普遍高于對照組。 (3)半滑舌鰨組織中OTC的殘留檢測分析在投藥期間

6、，OTC在實驗魚肌肉、血清和肝臟中的殘留量在投藥期間呈現(xiàn)累積和消除的平衡狀態(tài)，分別在第7天、第4天和第7天達到最大殘留量(3.14±0.27)μg/g、(3.05±0.29)μg/ml和(7.20±1.17)μg/g。在休藥期，三者都迅速下降，直到低于本實驗的檢測限0.05μg/g。OTC在肌肉，血清和肝臟三者中消除所需時間分別為10d、8d和12d。 (4)半滑舌鰨腸道細菌和弧菌耐藥率與魚體OTC殘留的擬合關(guān)系在OTC在魚體內(nèi)

7、的消除時間內(nèi)，通過對腸道細菌和弧菌的耐藥率和半滑舌鰨三種組織(肌肉、血清和肝臟)中OTC殘留量綜合分析可知，二者存在較好的相關(guān)性，從而獲得18條擬合曲線。通過測定半滑舌鰨腸道細菌的耐藥率來獲取魚體中各組織中OTC的殘留量，進而縮短了檢測時間，提高水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的質(zhì)量品質(zhì)控制水平。 本研究通過篩選實驗，使用海水營養(yǎng)瓊脂和海水TCBS作為養(yǎng)殖水體和水產(chǎn)動物腸道細菌和弧菌耐藥率的選擇培養(yǎng)基，對在半滑舌鰨正常投喂OTC的過程和投喂后進行耐