蜂產(chǎn)品中土霉素殘留的酶聯(lián)免疫檢測.pdf

1、該研究通過制備土霉素(oxytetracycline，OTC)的特異性抗體，建立了蜂產(chǎn)品中土霉素殘留的酶聯(lián)免疫吸附分析法(enzyme-linkedimmunosorbentassay，ELISA)。具體包括以下四個方面的內(nèi)容： 1.土霉素人工抗原的構(gòu)建OTC分子量為460.2，是只有反應(yīng)原性而無免疫原性的小分子物質(zhì)，必須與蛋白質(zhì)等載體結(jié)合轉(zhuǎn)化為完全抗原后才能刺激動物產(chǎn)生抗體。由于OTC分子結(jié)構(gòu)中含有氨基，所以可以以該基團為“橋

2、梁”將OTC和載體蛋白連接起來。 該研究首先分別以碳化二亞胺(1-ethy1-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimidehydrochloride，EDC)和戊二醛(commercialglutaraldehyde，GA)作為偶聯(lián)劑，將OTC與牛血清白蛋白(bovineserumalbumin，BSA)進行偶聯(lián)，合成了復合物OTC-BSA，并分析了不同連接劑對蛋白偶聯(lián)效果的影響。結(jié)果表明，以EDC

3、或GA為偶聯(lián)劑，均可得到OTC與BSA的偶聯(lián)物，但是偶聯(lián)物中OTC與BSA的摩爾比有很大的差異，以EDC為偶聯(lián)劑時OTC：BSA摩爾比為4.00：1，而以GA作為偶聯(lián)劑時僅為2.58：1，這說明EDC的偶聯(lián)效果比GA的好。 進一步就OTC與BSA偶聯(lián)時，BSA、OTC及偶聯(lián)劑的混合方法對偶聯(lián)物摩爾比的影響進行了研究，結(jié)果顯示，向BSA溶液中邊攪拌邊緩慢地滴加OTC和EDC溶液時OTC-BSA偶聯(lián)物中OTC與BSA的摩爾比較高，達

4、7.97：1。該連接物注射BALB/c小鼠后能獲得較好的抗體。 該研究還在上述研究的基礎(chǔ)上制備了OTC與卵清白蛋白(ovalbumin，OV)的偶聯(lián)物OTC-OV。 2.抗OTC抗體的制備以自制的OTC-BSA(摩爾比為7.97：1)連接物為免疫抗原注射BALB/c小白鼠，從抗體的產(chǎn)生進程來看，小鼠在第一次免疫后45天開始有明顯的抗體產(chǎn)生，90天達到高峰，然后開始下降，間接非競爭ELISA測得其最高效價為1：20,000

5、；進一步用間接競爭ELISA分析了此抗體的靈敏度與特異性，結(jié)果表明，所得抗體的靈敏度和特異性都較好，和其它結(jié)構(gòu)相似或相近物質(zhì)的交叉反應(yīng)率較低。 3.幾種蜂產(chǎn)品中OTC的ELISA檢測對蜂蜜、蜂花粉、蜂王漿中OTC的提取方法進行了研究，得出了它們的最佳提取方法和條件。以自制的抗血清建立的間接競爭ELISA法對幾種蜂產(chǎn)品中OTC的殘留量進行了檢測，所建立的間接競爭ELISA方法對土霉素的檢測范圍為5～200ng/ml，相關(guān)系數(shù)r=0