基于磁分離與質譜法的癌癥相關核酸分析方法研究.pdf

1、現(xiàn)代醫(yī)學與生命科學的很多研究成果顯示很多嚴重疾病的發(fā)生與基因突變密切相關，如癌癥和遺傳病等。由此可見，特定序列DNA的檢測分析在病原基因的測定、遺傳疾病的早期診斷和治療等方面具有非常重大的理論意義和應用價值。近年來，一系列快速可靠的特定序列DNA檢測技術得以迅速發(fā)展，核酸檢測目前廣泛應用于分子生物學、現(xiàn)代醫(yī)學、臨床診斷學等諸多領域。本論文以質譜為檢測手段，利用磁珠的富集分離特性，再結合核酸放大技術等有效方法，發(fā)展了一些列癌癥相關DNA序

2、列的分析檢測方案，主要包括以下幾部分內容：
　　TK1 mRNA與細胞分裂相關，它是腫瘤生長的一種重要的標志物。鑒定其在活體細胞內基因水平的變化對于理解生物學過程和疾病機制有重要的價值，對于癌癥的檢測、預防和治療也越來越不可或缺。在第2章中，我們發(fā)展了一種基于鑭系離子標記的等溫雜交鏈擴增技術檢測TK1 mRNA的新方法，鑒于HCR方法的優(yōu)勢和稀土離子標記DNA的可行性，本課題以HCR信號擴增為基礎、結合稀土標記的DNA之間互補雜交

3、的作用原理以及利用ICP-MS的高靈敏檢測來實現(xiàn)目標DNA的靈敏檢測。該檢測平臺主要包括如下幾個方面的工作:
　　1.參照已有文獻報道的合成方法實現(xiàn)稀土離子標記DNA探針。
　　2.利用磁納米顆粒的富集分離作用和HCR信號擴增方法實施檢測目標DNA的方案。
　　3.用ICP-MS檢測樣品中稀土離子強度，從而實現(xiàn)目標DNA的間接檢測。本方法綜合利用了HCR無酶恒溫信號放大、核酸適體的高特異性及ICP-MS靈敏度高、分辨率

4、高、穩(wěn)定性好和抗干擾性強等優(yōu)勢實現(xiàn)目標DNA序列的特異性檢測。
　　DNA甲基化是參與基因調控的一種重要表觀遺傳機制，它可以通過影響DNA構象、穩(wěn)定性和與蛋白質相互作用等方式實現(xiàn)對基因表達的調節(jié)，CpG島的甲基化可能是最早研究的發(fā)生在多種癌癥中的體細胞基因組改變之一。很多科學家報道了不同癌癥中發(fā)生的甲基化異?，F(xiàn)象，它已成為多種腫瘤診斷的生物標志物之一，因此DNA甲基化的分析對于了解表觀遺傳學的影響至關重要。在第3章中，我們借助于磁