海蓬子標(biāo)準(zhǔn)組分制備及其物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、本文首次對(duì)北美海蓬子的標(biāo)準(zhǔn)組分進(jìn)行了提取分離,建立了一套系統(tǒng)提取分離海蓬子組分的標(biāo)準(zhǔn)方法和標(biāo)準(zhǔn)組分庫(kù);主要運(yùn)用高效液相色譜技術(shù)對(duì)提取分離所得到的標(biāo)準(zhǔn)組分進(jìn)行了高效液相色譜分析;對(duì)標(biāo)準(zhǔn)組分的抗凝活性、抗氧化活性進(jìn)行了研究。為海蓬子的相關(guān)活性研究以及在藥物、保健品方面的研究開(kāi)發(fā)提供了物質(zhì)基礎(chǔ)和技術(shù)經(jīng)驗(yàn)。
　　提取部分采用速度快、提取效率高的超聲波輔助溶劑提取法。水溶性組分針對(duì)多糖進(jìn)行提取,分別采用超聲輔助水提、超聲輔助堿提以及超聲輔助

2、酶提三種方法進(jìn)行提取,對(duì)水提組分和酶提組分直接凍干,堿提組分醇沉干燥得到粗多糖。其他提取組分分別用95％乙醇、乙酸乙酯、氯仿和石油醚等不同極性溶劑,超聲波輔助溶劑提取,蒸干即得標(biāo)準(zhǔn)組分。水溶性組分和石油醚組分不再進(jìn)行分離。乙醇提取組分采用溶劑分配法進(jìn)行分離,先后用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取,蒸干得到溶劑分配組分。乙酸乙酯提取組分和氯仿提取組分則分別用硅膠柱進(jìn)行分離,得到硅膠柱分離組分。以上組分共同構(gòu)成了海蓬子標(biāo)準(zhǔn)組分庫(kù),共得到29

3、種標(biāo)準(zhǔn)組分。
　　對(duì)組分進(jìn)行化學(xué)分析以研究其物質(zhì)基礎(chǔ),本實(shí)驗(yàn)主要采用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)29種標(biāo)準(zhǔn)組分進(jìn)行分析。按照文獻(xiàn)中已有的單糖組成分析方法,對(duì)3種粗多糖成分進(jìn)行單糖組成研究,水解衍生后進(jìn)行HPLC分析,用乙腈-水作為流動(dòng)相進(jìn)行分析,得到分離效果好的液相圖譜。其他26種組分建立統(tǒng)一的液相方法進(jìn)行分析,并用紫外串聯(lián)蒸發(fā)光散射檢測(cè)器(DAD-ELSD)進(jìn)行檢測(cè),流動(dòng)相為甲醇-水體系,得到分離效果好的液相圖譜。
　　對(duì)

4、提取標(biāo)準(zhǔn)組分進(jìn)行部分藥理活性研究,主要包含:1、體外抗凝血活性研究,利用APTT試劑盒測(cè)定活化部分凝血活酶時(shí)間,并用肝素鈉作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果發(fā)現(xiàn),北美海蓬子水溶性組分、乙醇提取組分、乙酸乙酯提取組分、氯仿提取組分和石油醚提取組分均未明顯延長(zhǎng)凝血時(shí)間,表明其無(wú)明顯抗凝血活性。因此,本實(shí)驗(yàn)不再對(duì)分離組分進(jìn)一步研究。2、抗氧化藥理活性研究,分別采用·DPPH自由基清除實(shí)驗(yàn)、水楊酸法羥基自由基(·OH)清除實(shí)驗(yàn)以及鄰苯三酚自氧化法超氧自由基(·

5、O2-)清除實(shí)驗(yàn)研究組分抗氧化活性,并用L-抗壞血酸(VC)或丁基羥基茴香醚(BHA)作為陽(yáng)性對(duì)照。結(jié)果發(fā)現(xiàn),北美海蓬子各極性提取標(biāo)準(zhǔn)組分均有明顯的抗氧化活性,但清除效果均弱于陽(yáng)性對(duì)照。其中,組分對(duì)·OH自由基有明顯清除活性,在8 mg/mL濃度時(shí)抑制率均低于80%;濃度為5 mg/mL的各組分對(duì)·DPPH自由基的清除率均在80%以上,其中活性最強(qiáng)的為95%乙醇提取組分;各提取組分未表現(xiàn)出·O2-清除活性,對(duì)鄰苯三酚自氧化具有促進(jìn)作用。