PARP-1抑制劑PJ34對人肺腺癌順鉑耐藥細胞A549-DDP生長活性及耐藥性的影響.pdf

1、研究目的：
　　肺癌是威脅居民生命和健康的頭號殺手，非小細胞肺癌(Non-small cell lung cancer,NSCLC)占其組織學分型的絕大多數(shù)（75％-80%），并且大部分患者（80%）確診時已屬晚期，無手術機會，化學治療成為其主要治療方法。順鉑(Cisplatin,DDP)是目前臨床上最常用的化療藥物，它主要作用于腫瘤細胞DNA，抑制DNA的復制和轉錄，達到抗腫瘤目的。目前以DDP為基礎的聯(lián)合化療仍是國際公認的晚期

2、NSCLC的標準一線化療方案。然而，絕大多數(shù)患者在DDP用藥過程中會逐漸產生耐藥現(xiàn)象，導致腫瘤的復發(fā)以及治療的失敗。其耐藥機制至今仍未明確，這成為困擾當前肺癌治療的一大難題。聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(poly ADP-ribose polymerase,PARP)是一種多功能核蛋白酶，其在DNA損傷修復中發(fā)揮的關鍵作用使其成為近年來抗腫瘤研究的熱點之一。PARP-1的活性被抑制后，DNA單鏈損傷（single strand break,S

3、SBs）不能得到及時修復，從而不斷累積，并轉化成持續(xù)的DNA雙鏈損傷（double strand break,DSBs），最終導致細胞死亡。PJ34是新型的PARP-1競爭性抑制劑，據(jù)相關文獻報道對多種腫瘤具有顯著的增殖抑制作用。因此本研究探討PJ34對肺腺癌順鉑耐藥細胞株A549/DDP生長活性及耐藥性的影響，期望能為臨床上DDP耐藥NSCLC患者的治療提供一定的指導意義。
　　研究方法
　　1．體外培養(yǎng)人肺腺癌細胞株A5

4、49及其順鉑耐藥株A549/DDP，使用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色（tetrazolium-based eolorimetric assay,MTT）法分別檢測不同濃度梯度的DDP、PJ34單藥及無毒濃度的PJ34聯(lián)合DDP對A549/DDP細胞增殖及耐藥性的影響。
　　2．流式細胞術Annexin V-FITC/PI雙染法分別檢測IC50濃度的DDP、無毒濃度的PJ34單藥及二者聯(lián)合用藥對A549/DDP細胞凋亡的影響。

5、>　　3． Western Blot法分別檢測A549及A549/DDP細胞內PARP-1蛋白、MDR相關蛋白（LRP、GST-π）的表達水平，并比較IC50濃度的DDP、無毒濃度的PJ34單藥及二者聯(lián)合用藥對A549/DDP細胞內PARP-1蛋白、MDR相關蛋白（LRP、GST-π）的表達水平的影響。
　　研究結果
　　1.耐藥株A549/DDP對DDP的耐藥性明顯高于A549細胞，耐藥倍數(shù)為10.5倍。
　　2.

6、PJ34單藥對A549/DDP細胞有明顯的增殖抑制作用，呈濃度依賴性；無毒劑量的PJ34（3 mg?L-1）可顯著增強A549/DDP細胞對順鉑的敏感性，部分逆轉耐藥性，將DDP的IC50值由26.14±0.62 mg?L-1降低為11.46±0.92 mg?L-1，逆轉倍數(shù)（RF）為2.28倍。
　　3.流式細胞術檢測細胞凋亡顯示：3 mg?L-1（無毒劑量）的PJ34聯(lián)合12 mg?L-1（IC50濃度）的DDP作用于A549

7、/DDP細胞48h后，可顯著誘導細胞凋亡，凋亡率為33.2%，較DDP單藥組（17.74%）明顯升高。
　　4. Western Blot檢測蛋白表達顯示：與A549細胞株相比，A549/DDP耐藥株內PARP-1蛋白及MDR相關蛋白（LRP、GST-π）的表達水平明顯升高；與DDP、PJ34單藥組相比，PJ34聯(lián)合DDP可明顯降低A549/DDP細胞內PARP-1及LRP、GST-π蛋白的表達水平。
　　研究結論