中華按蚊線粒體基因組進(jìn)化及抗藥性相關(guān)基因多態(tài)性研究.pdf

1、中華按蚊Anopheles sinensis Wiedemann，1828隸屬按蚊屬（Genus Anopheles）、按蚊亞屬（Subgenus Anopheles）的赫坎按蚊種團(tuán)(An.hyrcanus group)，在我國(guó)分布廣泛，是瘧疾和絲蟲病的重要傳播媒介。本研究對(duì)中華按蚊宏基因組進(jìn)行測(cè)序和初步的生物信息學(xué)分析，拼接注釋中華按蚊的完整線粒體基因組，構(gòu)建了系統(tǒng)發(fā)育關(guān)系;并在基因組水平統(tǒng)計(jì)分析了與抗性相關(guān)的代謝解毒酶基因多態(tài)性，檢

2、測(cè)我國(guó)現(xiàn)場(chǎng)中華按蚊群體擊倒抗性基因(knockdown resistance gene，kdr)突變型，分析擊倒抗性的產(chǎn)生和發(fā)展的時(shí)空變化。取得如下結(jié)果:
　　1.采自山東北湖與曹縣2個(gè)現(xiàn)場(chǎng)中華按蚊樣本的宏基因組測(cè)序數(shù)據(jù)，經(jīng)組裝和初步注釋后，預(yù)測(cè)基因組大小分別為243Mb/276Mb，蛋白編碼基因數(shù)為22164個(gè)/19587個(gè)。
　　2.中華按蚊線粒體基因組全長(zhǎng)為15076 bp，包含37個(gè)編碼基因（13個(gè)蛋白編碼基因、22

3、個(gè)tRNA基因和2個(gè)rRNA基因）和控制區(qū)。基于全部蛋白編碼基因，構(gòu)建的18蚊種系統(tǒng)發(fā)育樹，分支合理、穩(wěn)定，且置信值高;而單個(gè)編碼基因的信息量不足。進(jìn)化分析結(jié)果顯示所有按蚊最近的共同祖先出現(xiàn)于約9861萬(wàn)年前，Nyssorhynchus亞屬的分化時(shí)間為約5114萬(wàn)年前，塞蚊亞屬的分化時(shí)間為約7419萬(wàn)年前，按蚊亞屬的2種分化時(shí)間為約5998萬(wàn)年前。
　　3.細(xì)胞色素P450、谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶和非特異性酯酶等8個(gè)與代謝抗性相關(guān)的代謝解

4、毒酶基因編碼區(qū)，在中華按蚊的基因組水平均存在一定程度的多態(tài)性，每1000 bp的SNP位點(diǎn)數(shù)從8.73到29.94，其中21.2％的SNP為非同義替換。
　　4.對(duì)1996至2014年采集自我國(guó)17個(gè)省31個(gè)地點(diǎn)的773個(gè)中華按蚊樣本的進(jìn)行kdr基因型檢測(cè)，結(jié)果顯示L1014位點(diǎn)存在點(diǎn)突變，共檢測(cè)到4種等位基因，編碼亮氨酸(L)的野生型TTG(62.01％)，以及3種kdr突變等位基因:編碼苯丙氨酸(F)的TTT(27.15％)和

5、TTC(1.30％)、編碼半胱氨酸(C)的TGT(9.55％)。存在10種基因型，包括野生型純合子TTG/TTG(55.25％)，突變型純合子TTT/TTT(17.60％)、TTC/TTC(0.27％)、TGT/TGT(1.91％)，突變型雜合子TTT/TTC(0.68％)、TTT/TGT(10.23％)、TTC/TGT(0.55％)，以及野生/突變型雜合子TTG/TTT(8.19％)、TTG/TTC(0.82％)和TTG/TGT(4.