線粒體基因組D-Loop區(qū)基因多態(tài)與男性OSAHS患者的相關性研究.pdf

1、目的： 1.分析OSAHS人群線粒體DNA（mtDNA）D-Loop區(qū)基因和劍橋標準序列之間的差異，并篩查與OSAHS相關的突變位點。 2.探討mtDNA D-Loop區(qū)基因變異與OSAHS主要臨床指標及并發(fā)癥的相關性，為OSAHS的發(fā)生發(fā)展提供預報。 方法： 1.標本的選取隨機選取60例經PSG監(jiān)測診斷為OSAHS的男性患者，按照PSG監(jiān)測結果，分為輕，中，重三組。同時選取102名正常成作為對照。以上兩

2、者均需排除糖代謝及內分泌紊亂的相關疾病，同時還需排除慢性阻塞性肺疾病，心功能不全，黃疸及中樞神經系統(tǒng)疾病。兩組年齡需匹配（P<0.05）。同時采集各研究對象的個人相關信息。 2.標本處理清晨空腹時抽取研究對象的外周靜脈血2-3ML，EDTA-K2抗凝，保存于-20℃待用。同時測量外周血中血糖，總膽固醇，甘油三酯，高密度脂蛋白，低密度脂蛋白含量。 3.mtDNA提取首先從外周血中提取人類基因組DNA后，在DNA中分別加入兩

3、對引物及PCR試劑后上PCR儀。PCR產物經瓊脂糖凝膠電泳明確目的條帶是否擴增出。PCR產物再次經過純化處理，最后經過瓊脂糖電泳判斷純化產物濃度。 4.標本測序純化產物上CEQ8800遺傳分析系統(tǒng)（美國貝克曼庫爾特公司）進行雙向測序，測序結果用DNASTAR軟件包中的Seqman進行序列分析，用其中的MegAlign進行與標準序列的比對，查找突變位點。 5.統(tǒng)計學分析使用SPSS11.5統(tǒng)計分析軟件。計量資料以X±S表示

4、呈正態(tài)分布的數(shù)據(jù)，組間比較采用t檢驗或x2檢驗，臨床資料等獨立變量進行多元Logistic回歸分析，統(tǒng)計檢驗水平為雙側0.05。 結果： 1. OSAHS組和正常對照組的mtDNA D-Loop區(qū)基因片段與標準劍橋序列比對，在兩組的每個樣本中均發(fā)現(xiàn)mtDNA D-Loop區(qū)有變異位點存在，共發(fā)現(xiàn)存在有178個變異位點，其中在60例OSAHS組中有75個變異位點，102例正常對照組有103個變異位點存在；其中發(fā)現(xiàn)在兩組中均

5、同時存在的變異位點有115個，而其余的63個變異位點為兩組中非共有的變異位點，有27個變異位點僅存在于OSAHS組中，有36個變異位點僅存在于正常對照組，其變異發(fā)生率低。經統(tǒng)計學分析，以上所有單個變異位點在OSAHS組與正常對照組間的分布均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）；但在兩組非共有的變異位點中，OSAHS組與正常對照組間存在著顯著性差異（P<0.05），OSAHS發(fā)生變異的位點明顯多于正常對照組。以上各突變在OSAHS組的輕，中，重三

6、組間無明顯差異。（P>0.05）. 2.在所有的變異位點中發(fā)現(xiàn)：變異率大于10%的高變異位點在OSAHS組中有21個，在正常對照組有24個位點，其中np73A-G在OSAHS組及對照組中變異率分別達到93.7%和84.2%，np263A-G在OSAHS組及對照組中的變異率分別達到90.4%和79.3%，np16223C-T在OSAHS組及對照組中的變異率分別達到50.1%和47.0%，np16189T-C在OSAHS組及對照組中

7、的變異率分別達到46.7%和29%，np16519T-C在OSAHS組及對照組中變異率分別達到53.3%和46% 3.發(fā)現(xiàn)np303～315（稱D310區(qū)）區(qū)域為高度變異區(qū)，并在該段區(qū)域存在多種變異形式. 4.OSAHS組有無基因突變的臨床資料比較，結果表明兩組之間頸圍，甘油三酯，低密度脂蛋白的差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）. 5.OSAHS組發(fā)生線粒體基因突變的患者臨床特征我們對其部分獨立變量進行了Logis

8、tic回歸分析，結果表明LDL-C是基因突變的相關因素。 結論： 1.OSAHS患者的mtDNA D-Loop基因區(qū)域存在大量變異位點，多為多態(tài)性現(xiàn)象 2.mtDNA變異位點可能與OSAHS患者的臨床表現(xiàn)及并發(fā)癥有密切聯(lián)系，需要增大樣本量和增加樣本類型來進一步證實。 3. OSAHS的臨床癥狀復雜，攜帶有不同變異患者的臨床表現(xiàn)各不相同，即使攜帶有同一變異因個體不同而臨床表現(xiàn)差異很大。 4.對于OS