EZH2通過(guò)調(diào)控miR-125b促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞增殖和遷移的初步探究.pdf

1、背景：
　　乳腺癌是女性最常見的一種惡性腫瘤，嚴(yán)重影響著女性群體的身體健康。EZH2（Enhancer ofzeste homolog2）是果蠅zeste基因增強(qiáng)子的人類同源物， PRC2(polycomb repressor complex2，多梳阻遏蛋白2復(fù)合體)復(fù)合物具有內(nèi)在的組蛋白甲基轉(zhuǎn)移酶的活性，其中EZH2是PRC2的核心組分，近期表觀遺傳學(xué)研究表明EZH2常與乳腺癌的不良進(jìn)展相關(guān)。MiRNAs(MicroRNAs，微

2、小RNA)是一類可以在轉(zhuǎn)錄后水平沉默靶標(biāo)mRNA的非編碼RNA。MiRNAs的異常調(diào)節(jié)在包括乳腺癌的多種疾病發(fā)生發(fā)展的過(guò)程中都十分常見。
　　目的：
　　本研究旨在探討 EZH2和 miR-125b與乳腺癌之間的關(guān)聯(lián)，并初步探究 EZH2和miR-125b作用關(guān)系與對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖活性與遷移過(guò)程作用的影響。
　　方法：
　　1.使用免疫組化法和Western blot法分別驗(yàn)證乳腺癌組織、細(xì)胞與癌旁正常組織、細(xì)胞

3、的 EZH2表達(dá)水平差異。然后利用實(shí)時(shí) PCR檢測(cè)了若干不同乳腺細(xì)胞系中miR-125b的mRNA表達(dá)水平趨勢(shì)。
　　2.通過(guò)向不同的乳腺癌細(xì)胞系轉(zhuǎn)染可以靶向抑制EZH2的siRNA（siRNA-EZH2）后利用實(shí)時(shí) PCR檢測(cè) miR-125b的相對(duì)表達(dá)量。再向非致瘤性乳腺上皮細(xì)胞系轉(zhuǎn)染EZH2質(zhì)粒使之過(guò)表達(dá)后利用實(shí)時(shí)PCR檢測(cè)miR-125b的相對(duì)表達(dá)量。
　　3.將 siRNA-EZH2、miR-125b抑制劑等分組共

4、轉(zhuǎn)染至 MDA-MB-231細(xì)胞，使用 MTT法檢測(cè)不同處理組細(xì)胞增殖情況變化，采用 transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力變化。
　　4.將 EZH2質(zhì)粒、miR-125bmimics（增強(qiáng)內(nèi)源性 miR-125b功能的模擬生物體內(nèi)源miR-125b）等分組共轉(zhuǎn)染至HMEC細(xì)胞，使用MTT法檢測(cè)不同處理組細(xì)胞增殖情況變化，transwell試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力變化。
　　結(jié)果：
　　1.乳腺癌細(xì)胞或組織中 EZH2的

5、表達(dá)水平明顯高于非致瘤性乳腺上皮細(xì)胞或組織而乳腺癌細(xì)胞系中miR-125b水平卻明顯低于非致瘤性乳腺上皮細(xì)胞。
　　2.經(jīng)測(cè)，轉(zhuǎn)染 siRNA-EZH2的不同乳腺癌細(xì)胞系中 miR-125b水平均有不同程度上升；轉(zhuǎn)染EZH2質(zhì)粒的非致瘤性乳腺上皮細(xì)胞系中miR-125b水平則明顯下降。
　　3.在MDA-MB-231細(xì)胞系中，MTT檢測(cè)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染siRNA-EZH2后細(xì)胞增殖能力明顯下降，相應(yīng)的， transwell試驗(yàn)亦

6、顯示細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力下降明顯；而共轉(zhuǎn)染siRNA-EZH2和miR-125b抑制劑組較僅轉(zhuǎn)染siRNA-EZH2組細(xì)胞增殖能力有顯著提高，細(xì)胞轉(zhuǎn)移能力也提升顯著。
　　4.在HMEC細(xì)胞系中，MTT檢測(cè)結(jié)果顯示轉(zhuǎn)染EZH2質(zhì)粒較對(duì)照組細(xì)胞增殖能力明顯升高；而共轉(zhuǎn)染EZH2質(zhì)粒和miR-125bmimics組較僅轉(zhuǎn)染EZH2質(zhì)粒組相比增殖能力受到明顯抑制。
　　結(jié)論：
　　研究結(jié)果表明，敲低 EZH2所導(dǎo)致的細(xì)胞增殖活性與遷