CD14、NF-κBp65在膿毒癥幼年大鼠急性腎損傷中的表達(dá)及烏司他丁對(duì)其干預(yù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　1.應(yīng)用盲腸結(jié)扎穿刺(CLP)術(shù)建立膿毒癥幼年大鼠模型，觀察膿毒癥幼年大鼠腎功能(血清肌酐、尿素氮濃度)變化及腎臟組織損傷情況。
　　2.觀察烏司他丁對(duì)膿毒癥幼年大鼠AKI血清TNF-α、IL-6水平及腎臟組織CD14、NF-κBp65表達(dá)的影響，探討其對(duì)膿毒癥幼年大鼠AKI可能的保護(hù)作用與機(jī)制。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)分組：健康清潔級(jí)4周齡雄性SD大鼠224只，隨機(jī)分成正常對(duì)照組(A組)32只、假

2、手術(shù)組(B組)32只、膿毒癥組(C組)80只、烏司他丁干預(yù)組(D組)80只，每組大鼠再隨機(jī)分為6h、12h、24h、48h4個(gè)亞組。
　　2.膿毒癥模型制備及藥物干預(yù)：A組：不行剖腹術(shù)及其他任何處理；B組：行剖腹術(shù)但不結(jié)扎盲腸及穿刺；C組：行盲腸結(jié)扎和穿刺術(shù)；D組：行盲腸結(jié)扎穿刺術(shù)造模后于0h、24h經(jīng)尾靜脈注射烏司他丁50mg/kg，其他3組分別注射等量9g/L鹽水。每組大鼠在造模后6h、12h、24h、48h被麻醉后采集血和腎

3、組織標(biāo)本。
　　3.檢測(cè)指標(biāo)：采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)血清Scr、BUN濃度；ELISA法檢測(cè)血清TNF-α、IL-6水平；RT-PCR法測(cè)定腎組織CD14 mRNA表達(dá)；免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)腎臟組織CD14、NF-κBp65蛋白表達(dá)含量；HE染色觀察腎臟組織病理改變等。
　　結(jié)果：
　　1.血清Scr濃度變化：與A、B組相比較，C、D組各時(shí)間點(diǎn)(除6h外)的血清Scr濃度升高(P<0.05)，12h開始升高，48h

4、達(dá)高峰；而D組各時(shí)間點(diǎn)(除6h外)血清Scr水平低于C組(P<0.01)。
　　2.血清BUN濃度變化：與A、B組相比較，C、D組各時(shí)間點(diǎn)的血清BUN濃度升高(P<0.01)，6h開始升高，48h達(dá)高峰；而D組各時(shí)間點(diǎn)血清BUN水平明顯低于C組(P<0.01)。
　　3.腎組織病理學(xué)改變：與A、B組相比較，C組6h可見腎臟組織中有少數(shù)腎小囊腔擴(kuò)大，在12h、24h、48h可見明顯擴(kuò)大的腎小囊腔，顯著腫脹、空泡變性的腎小管上皮

5、細(xì)胞，部分腎小球瘀血，腎臟組織中可見眾多炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，D組各時(shí)間點(diǎn)腎組織上述病理改變較C組明顯減輕。
　　4.血清TNF-α、IL-6水平變化：與A、B組相比較，C、D組各時(shí)間點(diǎn)的血清TNF-α、IL-6水平明顯升高(P<0.01)，6h血清TNF-α、IL-6水平開始升高，12h達(dá)高峰，24h、48h緩慢下降，但仍高于A、B組，而D組大鼠血清TNF-α、IL-6水平，在各時(shí)間點(diǎn)均顯著低于C組(P<0.01)。
　　5.腎臟

6、組織NF-κBp65蛋白表達(dá)：與A、B組相比較，C、D組各時(shí)間點(diǎn)腎臟組織NF-κBp65蛋白表達(dá)顯著升高(P<0.01)，6h開始升高，12h、24h、48h逐漸升高；而D組大鼠腎臟組織NF-κBp65蛋白表達(dá)，在各時(shí)間點(diǎn)均明顯低于C組(P<0.01)。
　　6.腎臟組織CD14mRNA、CD14蛋白表達(dá)：與A、B組相比較，C、D組各時(shí)間點(diǎn)腎臟組織CD14mRNA、CD14蛋白表達(dá)明顯升高(P<0.01)，6h開始升高，12h達(dá)高

7、峰，24h、48h緩慢下降，但仍高于A、B組；而D組大鼠腎臟組織CD14mRNA、CD14蛋白表達(dá)，在各時(shí)間點(diǎn)均低于C組(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1.采用CLP法制備的膿毒癥幼年大鼠模型是穩(wěn)定、可靠的。
　　2.膿毒癥幼年大鼠早期即可出現(xiàn)一定程度腎組織損傷和腎功能障礙。
　　3.烏司他丁可能通過下調(diào)LPS受體介導(dǎo)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路與NF-κB信號(hào)通路中CD14、NF-κBp65的表達(dá)，進(jìn)而抑制TNF-α、IL