選擇性清除同種反應(yīng)性T細(xì)胞誘導(dǎo)小鼠移植物長期存活的研究.pdf

1、目的：探討通過抗γc單抗(抗γ公共鏈單抗)聯(lián)合供者脾細(xì)胞預(yù)刺激(體外)或供者脾細(xì)胞特異性輸注(體內(nèi))，選擇性清除同種反應(yīng)性T細(xì)胞誘導(dǎo)移植物長期存活的可行性及相關(guān)機(jī)制。 方法：1、體外部分：體外實(shí)驗(yàn)：將CFDA-SE標(biāo)記BALB/C(H2d)脾細(xì)胞與絲裂霉素處理的C57BL/6小鼠(H2b)脾細(xì)胞行單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(MLC)，設(shè)立為陽性對照組A，單獨(dú)BALB/C脾細(xì)胞培養(yǎng)作為陰性對照組B并觀察增殖情況。實(shí)驗(yàn)組C于MLC第1天加

2、入抗γ公共鏈抗體，第4天流式細(xì)胞術(shù)觀察標(biāo)記細(xì)胞的增殖情況。2、體內(nèi)部分：(1)分離BALB/C、C57BL/6脾細(xì)胞進(jìn)行單向混合淋巴細(xì)胞培養(yǎng)(用絲裂霉素處理后的C57BL/6脾細(xì)胞為刺激原)。組1于MLC同時(shí)加入抗γ公共鏈抗體(終濃度100mg/L)；組2MLC為陽性對照；培養(yǎng)48hs后經(jīng)尾靜脈輸注(108個(gè)細(xì)胞)給在7天前行C57供者皮膚移植的nudeBALB/C小鼠；(2)建立BALB/C到C57BL/6小鼠頸部異位心臟移植模型，組

3、Ⅰ為對照組，單純行同種心臟移植；組Ⅱ和組Ⅲ于移植前第7天給予1×107nudeBALB/C脾細(xì)胞靜脈輸注，以及分別于移植前第7、5、3和1天給予生理鹽水或抗γc單抗和抗IL-2Rβ單抗混合液尾靜脈注射：術(shù)后觀察移植物的存活時(shí)間、血清IL-10濃度、受者淋巴細(xì)胞中Tr比例的改變以及同種抗原刺激后增殖活性變化。 結(jié)果：1、體外部分：熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀可觀察到標(biāo)記細(xì)胞。組A檢測到標(biāo)記細(xì)胞熒光強(qiáng)度出現(xiàn)倍減現(xiàn)象，表明細(xì)胞發(fā)生了增殖；而

4、陰性對照組B及抗γ公共鏈抗體處理組C熒光強(qiáng)度無明顯變化，未觀察到明顯的細(xì)胞增殖。2、體內(nèi)部分：(1)組2中nudeBALB/C小鼠平均皮片存活時(shí)間為14d，組1皮片生長良好，存活時(shí)間均＞100d(p＜0.001)，病理學(xué)切片顯示移植皮片組織層次和血管結(jié)構(gòu)較清晰，僅見少量淋巴細(xì)胞浸潤，符合皮膚移植耐受表現(xiàn)；且組2血清IL-10水平增高(p＜0.001)而脾細(xì)胞增殖活性減低(p＜0.001)。(2)心臟移植物平均存活時(shí)間組Ⅲ為50.17±3

5、3.85d，顯著長于組Ⅰ(8.67±0.52d，p＜0.05)及組Ⅱ(4.83±0.52d，p＜0.05)；組ⅢIL-10血清濃度較組Ⅰ及組Ⅱ明顯增高；FACS分析顯示組Ⅲ脾細(xì)胞中Tr比例平均3.85±0.59％，明顯高于正常C57BL/6的水平(p＜0.01)；受者脾細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示組Ⅲ增殖活性平均為20.18±0.34％，明顯低于組Ⅱ(37.53±0.18％，p＜0.001)。 結(jié)論：抗γ公共鏈單抗可抑制同種反應(yīng)性T細(xì)胞