染色體核型分析及熒光原位雜交檢測助孕夫婦自然流產(chǎn)絨毛組織染色體異常.pdf

1、研究背景
　　自然流產(chǎn)一般是指孕不足22周、胚胎或者胎兒體重不足500g時，已死亡的組織或其附屬物從母體中排出。造成自然流產(chǎn)的原因很多，主要包括遺傳因素、解剖因素、免疫因素、感染因素、內(nèi)分泌因素及環(huán)境因素等，其中遺傳因素是導(dǎo)致其發(fā)生的主要原因。遺傳因素中的胚胎染色體異常目前被認(rèn)為是已知最為常見的自然流產(chǎn)誘發(fā)因素。
　　絨毛膜的絨毛細(xì)胞具有和胚胎組織相同的遺傳信息，因此，通過對絨毛細(xì)胞進(jìn)行染色體檢查，可以了解胚胎細(xì)胞的遺傳性狀

2、，不僅能對自然流產(chǎn)的病因作出遺傳學(xué)的判斷，還可以為染色體病的早期產(chǎn)前診斷提供理論依據(jù)。目前檢測染色體異常的主要手段是細(xì)胞培養(yǎng)后行染色體G顯帶核型分析，這種傳統(tǒng)的方法存在較多的局限性，例如:細(xì)胞培養(yǎng)成功率較低，只能檢測培養(yǎng)后的中期細(xì)胞，難以做出嵌合體的診斷，無法檢測一些微小倒位、重排、缺失和標(biāo)記染色體等，因而不能完全滿足當(dāng)前的要求。
　　熒光原位雜交(fluorescentinsituhybridization，F(xiàn)ISH)技術(shù)是在分

3、子生物學(xué)、細(xì)胞遺傳學(xué)和免疫學(xué)的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的一項(xiàng)新技術(shù)，其按照堿基互補(bǔ)配對原則，應(yīng)用染色體特異性探針與待測DNA互補(bǔ)鏈雜交，通過觀察熒光顯微鏡下信號的顏色和數(shù)目即可做出診斷，其檢測快速、結(jié)果判讀簡單，對所檢測的樣本要求低，部分彌補(bǔ)了細(xì)胞遺傳學(xué)方法的不足，顯著提高了識別異常的能力，為檢測染色體的數(shù)目及部分結(jié)構(gòu)異常、確認(rèn)標(biāo)記染色體等研究提供了新的手段。
　　胚胎染色體異常與孕早期胚胎停育關(guān)系密切，核型異常種類多樣，如果能常規(guī)進(jìn)行孕早

4、期自然流產(chǎn)組織的染色體分析，將有助于提高異常核型胚胎的檢出率。若有條件收集大樣本、多區(qū)域的數(shù)據(jù)結(jié)果進(jìn)行分析，將更有助于探討自然流產(chǎn)的病因，為遺傳咨詢及優(yōu)生優(yōu)育提供指導(dǎo)。
　　研究目的
　　應(yīng)用傳統(tǒng)染色體核型分析及熒光原位雜交(FISH)技術(shù)對自然流產(chǎn)胎兒絨毛組織進(jìn)行遺傳學(xué)檢測，分析導(dǎo)致自然流產(chǎn)發(fā)生的常見染色體異常的類型，探討這;兩種技術(shù)在檢測自然流產(chǎn)絨毛組織染色體異常中的應(yīng)用價(jià)值以及孕周、孕婦年齡、流產(chǎn)次數(shù)、助孕方式及其他相

5、關(guān)因素與胚胎染色體異常的關(guān)系。
　　研究方法
　　收集2010年8月至2013年10月于山東大學(xué)附屬生殖醫(yī)院就診的579例發(fā)生自然流產(chǎn)并以適當(dāng)方式終止妊娠的孕婦的胎兒絨毛組織，其中449例絨毛組織進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，培養(yǎng)成功的樣本行G顯帶核型分析;228例絨毛組織應(yīng)用FISH技術(shù)檢測13、16、18、21、22、X、Y染色體數(shù)目異常?；仡櫺苑治鲈袐D的臨床資料，并對上述兩種方法的檢測結(jié)果進(jìn)行總結(jié)、比較，采用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS19.0進(jìn)

6、行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
　　結(jié)果
　　1.在449例行傳統(tǒng)染色體核型分析的標(biāo)本中，因絨毛量少無法培養(yǎng)3例，細(xì)菌污染92例，不明原因細(xì)胞死亡101例，其他培養(yǎng)失敗115例，核型報(bào)告率30.73％，失敗率69.27％。共檢出異常核型17例，異常率為12.32％(17/138)。有98例標(biāo)本后又運(yùn)用FISH方法檢測;
　　2.在228例行FISH檢測的自然流產(chǎn)標(biāo)本中，共檢測出異常標(biāo)本86例，異常率為37.72％;有孕周記錄的有效樣本

7、204例，在不同孕期的分布:早期妊娠（小于12周）、中期妊娠（12～23周）的樣本數(shù)分別為196例、8例，各占比例96.08％、3.92％;前三位最常見的染色體數(shù)目異常為三體型46例(53.49％)，三倍體12例(13.95％)和X單體5例(5.81％);
　　3.有14例行傳統(tǒng)核型分析有結(jié)果后又行FISH檢測，兩種結(jié)果相比較有4例不一致。其余10例結(jié)果一致，一致率為71.43％;
　　4.復(fù)發(fā)性自然流產(chǎn)患者絨毛染色體核型異

8、常率為44.19％，高于初次自然流產(chǎn)的患者34.38％的異常率，既往流產(chǎn)次數(shù)多的患者絨毛染色體異常率有所升高，但差異不顯著;采用IVF助孕的患者絨毛染色體核型異常率為31.36％，低于采用ICSI助孕患者44.44％的異常率，但二者差異不顯著。
　　結(jié)論
　　1.染色體數(shù)目異常是導(dǎo)致自然流產(chǎn)發(fā)生的重要因素，對自然流產(chǎn)孕婦行絨毛染色體檢測及相關(guān)遺傳咨詢是有必要的;
　　2.自然流產(chǎn)組織中，排名前三位的染色體異常類型是常染

9、色體三體型、三倍體和X單體;
　　3.傳統(tǒng)核型分析是檢測染色體異常的金標(biāo)準(zhǔn)，但由于這種方法有細(xì)胞培養(yǎng)時間長、影響因素多、分析過程復(fù)雜、失敗率高、重復(fù)性差等局限性，因此不能完全勝任對自然流產(chǎn)組織的檢查要求;
　　4.FISH技術(shù)在檢測自然流產(chǎn)組織染色體異常時具有操作簡單、快速及準(zhǔn)確性、成功率高等優(yōu)勢，同時對所檢測的樣本要求低，是一種更適合臨床要求的檢測方法;
　　5.既往流產(chǎn)次數(shù)多的患者其流產(chǎn)組織染色體異常率有所升高，但