21-三體、性染色體非整倍體熒光原位雜交診斷體系的建立和應(yīng)用.pdf

1、染色體病是先天性染色體數(shù)目異?；蚪Y(jié)構(gòu)畸變而引起的疾病，是引起出生缺陷的主要疾病之一。這類綜合征臨床常表現(xiàn)為多發(fā)畸形、智力低下和生長(zhǎng)發(fā)育遲緩等癥狀。染色體綜合征可分為常染色體綜合征和性染色體綜合征，前者以21-三體綜合征多見(jiàn)，其發(fā)病率在活嬰中為1/600～1/800。性染色體又以Klinefelter綜合征和Turner綜合征多見(jiàn)，前者在男性新生兒中的發(fā)病率為1/600～1/1000，Turner綜合征在活體女嬰中發(fā)病率為1/2500～1

2、/5000。Klinefelter綜合征主要表現(xiàn)為性腺功能減退，Turner綜合征則主要表現(xiàn)為身材矮小和性腺發(fā)育不全，如能早期發(fā)現(xiàn)，激素替代治療將有利于減輕癥狀。 目前常規(guī)染色體核型分析是染色體異常檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)方法，不僅可以檢出染色體的數(shù)目異常，而且可以檢測(cè)染色體平衡異位等結(jié)構(gòu)異常。但該方法操作過(guò)程繁瑣，常因細(xì)胞培養(yǎng)污染而影響結(jié)果判斷；耗時(shí)長(zhǎng)，往往過(guò)長(zhǎng)的等候時(shí)間會(huì)增加孕婦心理壓力而導(dǎo)致流產(chǎn)；對(duì)小于4.5Mb的染色體異常診斷困難，這

3、些缺陷限制了此方法的廣泛應(yīng)用。因此在過(guò)去10余年間，一些新的方法相繼被開(kāi)發(fā)出來(lái)用于產(chǎn)前以及產(chǎn)后染色體異常快速診斷，其中FISH技術(shù)應(yīng)用最廣，該方法主要使用染色體特異的熒光探針針對(duì)間期細(xì)胞核進(jìn)行檢測(cè)，具有快速、敏感性和特異性高，對(duì)許多遺傳病的病因分析以及致病基因的鑒定都具有重要價(jià)值。本研究通過(guò)自制熒光原位雜交探針，建立特異性、高通量快速檢測(cè)染色體數(shù)目異常的方法，為臨床應(yīng)用提供幫助。 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模鹤灾?1、X、Y染色體特異的熒光原位雜

4、交探針，對(duì)高危孕婦進(jìn)行21三體以及性染色體非整倍體進(jìn)行快速產(chǎn)前診斷。 實(shí)驗(yàn)方法： (1)通過(guò)對(duì)所選BAC克隆進(jìn)行切口平移標(biāo)記熒光素制備21號(hào)染色體特異的熒光原位雜交探針；使用PCR方法針對(duì)X染色體著絲粒區(qū)和Y染色體長(zhǎng)臂異染色區(qū)重復(fù)單元進(jìn)行擴(kuò)增，PCR產(chǎn)物進(jìn)行標(biāo)記制備X和Y染色體特異的熒光原位雜交探針。對(duì)制備的21、X、Y探針在培養(yǎng)的外周血標(biāo)本中雜交分析探針的分析靈敏度。 (2)自制的熒光探針對(duì)選取的28例高危孕婦

5、進(jìn)行產(chǎn)前檢測(cè)，并將FISH雜交分析結(jié)果與染色體核型分析結(jié)果進(jìn)行比較，分析探針的診斷靈敏度和特異度。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： (1)自制的熒光原位雜交探針雜交特異性高、熒光信號(hào)強(qiáng)。21染色體探針在外周血中期相細(xì)胞的分析靈敏度約為94.5％，在間期細(xì)胞中的分析靈敏度約為93.6％；XY混合探針在男性外周血中期相細(xì)胞的分析靈敏度約為96.5％，在間期細(xì)胞中的分析靈敏度約為95.4％；而XY混合探針在女性外周血中期相細(xì)胞的分析靈敏度約為94

6、.3％，在間期細(xì)胞中的分析靈敏度約為93.2％。 (2)28例羊水標(biāo)本中，F(xiàn)ISH檢測(cè)未見(jiàn)異常26例，雜交結(jié)果與核型分析結(jié)果一致，其中46，XX14例、46，XY12例；共檢出非整倍體2例，其中21三體1例(47，XY，+21)，Klinefelter綜合征(48，XXY)1例，與核型分析結(jié)果一致。 結(jié)論： 1.本研究成功制備了21、X、Y染色體FISH探針，并建立了FISH技術(shù)檢測(cè)21-三體、性染色體數(shù)目異常性