不同低溫對大鼠脊髓缺血再灌注損傷的影響研究.pdf

1、第一部分自制大鼠降溫/復溫操作臺在大鼠脊髓腰段缺血再灌注模型的應用
　　目的：檢測應用自制大鼠低溫實驗降溫復溫操作臺大鼠的降溫與復溫效果，建立大鼠脊髓腰段缺血再灌注模型。
　　方法：選取15只成年健康雄性SD大鼠作預實驗，另外選取20只成年健康雄性SD大鼠隨機分為常溫實驗組（n=10），低溫實驗組（n=10）作正式實驗。大鼠10％水合氯醛麻醉，固定于自制大鼠實驗臺上。腹部手術區(qū)備皮，消毒，取腹正中線作切口，暴露腹主動脈，分別

2、游離左腎動脈下及左、右髂總動脈分叉以上的腹主動脈。尾靜脈注射肝素抗凝。動脈夾夾閉腹主動脈上、下端,90 min后開放,逐層關腹。術后肌注青霉素預防感染。手術過程中，其中常溫組以烤燈保溫，使肛溫維持在37℃左右；低溫組在術前將大鼠置于降溫盒中將溫度降至目標溫度（以低溫18℃為目標溫度），術中如果肛溫過低則移至復溫臺用復溫燈加熱防止溫度過低，控制在目標溫度1-2℃的范圍進行手術操作。術后用復溫燈將大鼠體溫恢復至術前范圍附近。大鼠完全清醒后放

3、入單籠飼養(yǎng)。于再灌注24h，72h，1w觀察各組大鼠并對其后肢運動功能進行評分，取再灌注1w各組大鼠的L2-L5節(jié)段脊髓組織作HE染色。
　　結果：15例預實驗中，10例存活，5例死亡。死亡原因，其中術中失血過多死亡2例，降溫過低死亡2例，術后腸梗阻死亡1例。正式實驗各組大鼠均存活，常溫組在手術過程平均溫度37.75±1.36℃；低溫組降溫至28℃平均時間30.20±3.63min，降至18℃平均時間為51.00±4.85min。

4、術后復溫，18℃復溫至28℃所需平均時間45.00±4.79min，18℃復溫至正常所需平均時間63.80±4.34min。術后24h，72h，1w大鼠Tarlov評分低溫組均明顯比同期常溫組的高，差異具有顯著性。1w后脊髓 HE染色結果常溫組神經(jīng)元輕度腫脹，胞漿有空泡形成，部分神經(jīng)元核仁不清，周圍間隙增寬；低溫組部分神經(jīng)元輕度腫脹，包漿少量空泡形成，神經(jīng)核仁邊際清晰，受損情況顯著輕于常溫組。
　　結論：自制大鼠低溫實驗降溫復溫操

5、作臺大鼠的降溫與復溫效果顯著，可重復性高，成功建立大鼠脊髓腰段缺血再灌注模型，低溫組脊髓損傷情況顯著優(yōu)于常溫組。
　　第二部分不同低溫對大鼠脊髓缺血再灌注損傷后Bax及Bcl2蛋白的影響
　　目的:觀察不同低溫對大鼠脊髓缺血再灌注損傷的保護作用及其對凋亡蛋白Bax、bcl2表達的影響。
　　方法:將60只SD大鼠隨機分為4組：低溫18℃實驗組(A組);低溫28℃實驗組(B組);常溫手術對照組(C組);常溫假手術組(D組

6、)。前三組采用手術夾閉大鼠左腎動脈與左右髂總動脈分叉上端腹主動脈90min致脊髓缺血，然后松開再灌注，低溫組在阻斷前約50min降至目標溫度，解除阻斷后約60min內將體溫升至37.0℃。每只大鼠再灌注72h及1w兩個時間點均按照Tarlov法對下肢進行評分。每組分為24h、72h、1w三個不同時間點取L1-L5段脊髓，每個時間點5只大鼠，采用普通病理HE染色、Nissl染色，從形態(tài)學上觀察脊髓組織，TUNEL法觀察細胞凋亡情況，RT-

7、PCR、免疫組化染色及Western Blot法觀察脊髓組織Bax蛋白及Bcl2蛋白表達情況。
　　結果:Tarlov神經(jīng)評分結果顯示，低溫組下肢恢復情況明顯好于常溫組，而B組評分又略高于A組。組織形態(tài)學觀察D組未發(fā)現(xiàn)明顯病理學改變，A、B、C三組均出現(xiàn)不同程度病理改變，且B組輕于A組，A組輕于C組；病理學累積評分A、B、D組明顯低于C組。TUNEL結果顯示：D組幾乎未發(fā)現(xiàn)凋亡細胞，C組神經(jīng)元細胞凋亡情況較A組及B組明顯，RT-P

8、CR、免疫組化及Western Blot結果顯示：Bax蛋白在A、B組各時間點均低于于C組，但B組降低比A組明顯；兩兩組間比較，差異有統(tǒng)計學意義。Bcl蛋白在A、B、D組各時間點均高于C組，且B組較A組高，兩兩組間比較，差異具有統(tǒng)計學意義。
　　結論：低溫保護下肢神經(jīng)功能及減少神經(jīng)元的死亡，對大鼠SCII有保護作用,并且可能通過抑制Bax蛋白的表達及活化Bcl2蛋白的表達，抑制神經(jīng)元凋亡發(fā)揮其保護作用。過低溫度則可能通過抑制Bcl