受體酪氨酸激酶在霍奇金淋巴瘤中作用的研究.pdf

1、目的：
　　經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤(cHL)是一種B細胞來源淋巴瘤，它的特點是少數(shù)腫瘤細胞周圍被占絕大多數(shù)的反應(yīng)性細胞所包圍。這些反應(yīng)性細胞提供支持HRS細胞（霍奇金細胞和鏡影細胞）生存和生長的微環(huán)境。腫瘤細胞和微環(huán)境之間的相互作用包括多個受體酪氨酸激酶(RTK)的異常活動。胰島素樣生長因子1受體(IGF-1R)是RTK的一種，它在許多惡性腫瘤的增殖、轉(zhuǎn)化、細胞凋亡保護和化療耐藥中起著重要的作用。IGF-1R通路除了促進增值的作用，它

2、與上皮細胞的高分化相關(guān)。IGF-Ⅰ促進細胞的增殖和分化，而IGF-Ⅰ對分化的影響可能通過ERK通路來實現(xiàn)。我們假設(shè)有一個共表達受體抑制IGF-1R的ERK通路。有報道ephrin配體與Eph受體的接合導致的通過Ras-ERK途徑影響IGF-1R分化作用。因此有必要對兩種RTK受體同時研究。Ephrin家族是酪氨酸激酶最大的成員，近年來它對腫瘤研究引起越來越大的興趣。Ephrin的獨特之處是，Eph受體和ephrin配體都是結(jié)合在細胞膜上

3、，激活的信號轉(zhuǎn)導通路，一般發(fā)生在直接接觸的細胞之間，并且具有雙向信號傳導。Ephrin在許多細胞活動中起關(guān)鍵作用包括細胞運動和粘附。在這項研究中，我們評估了在cHL中IGF-1R的表達、預后意義和功能。最近的研究發(fā)現(xiàn)在人類惡性腫瘤中Ephrin的表達提高或缺失。Ephrin對霍奇金淋巴瘤HRS細胞的作用是未知的，本研究中我們同時對Eph受體和Ephrin配體在霍奇金淋巴瘤的表達進行研究。
　　方法:
　　1.在80例cHL病

4、例組織中應(yīng)用免疫組化技術(shù)進行IGF-1R抗體染色。采用卡方、Fisher確切概率檢驗和Mann-Whitney檢驗分析IGF-1R的表達與臨床資料關(guān)系，使用Kaplan-Meier的方法計算生存曲線。用Western印跡分析來確定三個cHL細胞系（L428、L1236和KMH2）的IGF-1R表達水平，并用ELISA法測定三個cHL細胞系的IGF-1分泌。用Alamar藍檢測IGF-1或cyclolignan picropodophyl

5、lin（PPP，一種高度選擇性的IGF-1R抑制劑）處理后對細胞增殖的影響，流式細胞術(shù)分析PPP處理后細胞周期分布，Western印跡法評估IGF-1或PPP處理后IGF-1R和關(guān)鍵的下游信號分子變化。
　　2.在霍奇金淋巴瘤細胞系使用定量PCR和免疫細胞化學染色，以確定在霍奇金淋巴瘤細胞系在RNA水平和蛋白水平的Ephrin家族表達模式。我們總共使用了8個HL細胞系，并測試這些細胞系七個EphA受體(A1-A7)、五個EphB受

6、體(B1-B5)、五個ephrinA配體(A1-A5)和三個ephrinB配體(B1-B3)的表達。通過定量PCR在2例NLP病人和2例CHL病人冰凍組織中分析了Ephrin家族成員在HL組織中的表達。根據(jù)這一結(jié)果在5例NLP-HL標本和25例cHL標本中進行免疫組化檢測。
　　結(jié)果:
　　1.cHL患者中有55％(44/80)檢測到IGF-1R陽性表達。IGF-1R表達在cHL亞型有一個顯著差異(P=0.0157)，結(jié)節(jié)性

7、硬化陽型病例的比例高(38/61)而混合細胞性病例陽性的比例低(1/9)。IGF-1R表達與年齡，EBV狀態(tài)或Ann Arbor分期之間沒有相關(guān)性。IGF-1R陽性患者組的總生存率(OS)為98％，而IGF-1R陰性患者組總生存率(OS)為83％(p=0.029)。IGF-1R陽性患者的5年無進展生存率(PFS)為93％，而在IGF-1R陰性患者的5年P(guān)FS分別為77％(P=0.047)。所有三個cHL細胞系均顯示IGF-1R的表達，L

8、428表達水平最高。3個細胞系中IGF1的分泌水平是相似的。IGF-1對L428的細胞增殖有最明顯的影響(增加31％)，而在其他2個細胞系僅有很小的影響。L428細胞對IGF-1最敏感，這與其IGF-1R表達水平高相一致。PPP（2μM）處理72小時后，在所有3個cHL細胞系的活力和增殖能力下降，L428細胞抑制作用最強，細胞增殖減少了48％。PPP誘導所有3個細胞系的G2/M細胞周期阻滯。IGF-1刺激30分鐘，L428細胞的IGF-

9、1R、Akt和ERK磷酸化上調(diào)。PPP處理降低L428細胞IGF-1R和Akt磷酸化，而ERK磷酸化上調(diào)。PPP也降低了pCdc2(Thr14/Tyr15)，并上調(diào)cyclinB1的表達，這與G2/M-phase細胞周期阻滯是一致的。
　　2.在RNA水平:霍奇金淋巴瘤細胞系中表達除EphA2和ephrinB3外的所有ephrin家族成員;EphB1、EphB2、EphB4和ephrinA5表達在腫瘤微環(huán)境中。根據(jù)8種HL細胞系q

10、PCR和免疫化學的表達模式我們選擇了感興趣的Ephrin家族成員。我們通過免疫組化研究5例NLP-HL和25例cHL組織EPHA1、EPHA3、EPHB1受體和ephrinA3、ephrinA4和ephrinB1配體的表達。我們發(fā)現(xiàn)了結(jié)節(jié)性淋巴細胞為主型(NLP-HL)和經(jīng)典型霍奇金淋巴瘤(cHL)不同的表達模式。NLP-HL沒有表達ephrinA3，而cHL表達ephrinA3。相反，NLP-HL表達EPHA1，而cHL并沒有表達EP

11、HA1。免疫組化顯示除了表達在腫瘤細胞ephrin家族廣泛表達在霍奇金淋巴瘤的腫瘤微環(huán)境中。
　　結(jié)論:
　　1.我們發(fā)現(xiàn)，IGF-1R表達在55％cHL患者中，在結(jié)節(jié)硬化型中具有較高的比例。在cHL細胞系中同時表達IGF-1R和IGF-1。盡管霍奇金細胞系中IGF-1R具有促進增殖作用，PPP作用后G2/M期細胞的比例增加，IGF-1R在腫瘤組織HRS細胞中的表達則提示良好的預后。
　　2.我們發(fā)現(xiàn)ephrin家族的