間充質(zhì)干細(xì)胞抗肝臟纖維化作用及其機(jī)制的探索研究.pdf

1、間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells，MSCs)由于其多向分化潛能、免疫調(diào)節(jié)和多因子分泌功能等諸多特性而成為干細(xì)胞研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。近年來，越來越多研究顯示了MSCs在組織修復(fù)和疾病治療方面的應(yīng)用潛能。本研究重點(diǎn)探討了小鼠骨髓MSCs(mBM-MSCs)的抗肝臟纖維化作用，以及其中的細(xì)胞和分子機(jī)制。
　　 首先我們證實(shí)了mBM-MSCs移植能向損傷肝臟遷移和整合，并且通過抑制纖維化過程中肝星狀細(xì)胞活化，有效降

2、低小鼠肝臟纖維化程度。隨后在全基因芯片鑒定肝臟損傷相關(guān)因子時，我們發(fā)現(xiàn)Delta-like1(Dlk1)在損傷肝臟中急劇表達(dá)，提示其在肝臟損傷過程中可能發(fā)揮一定作用。因此我們對Dlk1在肝臟纖維化過程中的作用和機(jī)制做了進(jìn)一步探討。體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)了Dlk1促肝臟纖維化的重要作用。研究結(jié)果提示肝損傷過程中實(shí)質(zhì)細(xì)胞表達(dá)Dlkl并通過旁分泌的方式作用于肝星狀細(xì)胞，促進(jìn)肝星狀細(xì)胞活化，其中50kDa的游離片段起主要作用，而非25 kDa的小片段。

3、
　　 進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)mBM-MSCs移植顯著抑制肝纖維化過程中Dlk1的表達(dá)，而且主要在mRNA水平。免疫熒光雙標(biāo)以及后續(xù)“rescue”實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)了mBM-MSCs對Dlk1表達(dá)的抑制在其抗纖維化過程中起關(guān)鍵性作用。隨后體外共培養(yǎng)等一系列實(shí)驗(yàn)表明，mBM-MSCs通過分泌因子調(diào)控Dlk1表達(dá)，而成纖維細(xì)胞生長因子2(FGF2)可能是其中重要因子之一。單獨(dú)使用18kDa FGF2在體內(nèi)外也能有效抑制Dlk1表達(dá)和肝星狀細(xì)胞

4、活化、降低肝臟纖維化，從側(cè)面驗(yàn)證了FGF2在mBM-MSCs調(diào)控Dlk1過程中的作用，并提示了該因子抗肝臟纖維化新功能。
　　 綜上所述，本研究證實(shí)了小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植的抗肝臟纖維化效果，并展示了其中相關(guān)細(xì)胞和分子機(jī)制：肝實(shí)質(zhì)細(xì)胞接受損傷信號刺激表達(dá)Dlk1并通過旁分泌方式促進(jìn)肝星狀細(xì)胞活化，參與肝臟纖維化發(fā)生；mBM-MSCs移植以Dlk1為靶點(diǎn)，通過分泌FGF2抑制其表達(dá)而降低肝星狀細(xì)胞活化水平，最終發(fā)揮抗肝臟纖維化功