睫狀體-虹膜-房水免疫應答途徑與角膜移植免疫排斥反應機理的研究.pdf

1、目的:研究睫狀體-虹膜-房水免疫應答途徑在角膜移植免疫中的作用，進一步揭示角膜免疫排斥反應的發(fā)生機理。 方法:建立兩組BALB/C小鼠穿透性角膜移植動物模型，A組為同種異體移植組，供體角膜植片來自C57BL/c小鼠；B組為同種系移植組，供體角膜植片來自BALB/C小鼠。術后定期觀察角膜植片情況，并進行免疫學和組織學檢查。(1)CD4+T淋巴細胞檢測：應用免疫組織化學的方法，檢測角膜移植術后不同時間CD4+T淋巴細胞在角鞏膜緣、睫

2、狀體-虹膜、前房和角膜植片中的浸潤情況，判斷其遷移路徑；(2)虹膜-睫狀體新生血管和淋巴管的檢測：分別取正常小鼠以及角膜移植術后3、7和14天小鼠，制作虹膜-睫狀體組織鋪片，應用CD31和LYVE-1單克隆抗體(IgG)進行免疫熒光染色，觀察虹膜-睫狀體中新生血管和淋巴管在角膜移植手術前后的變化；(3)角膜和虹膜-睫狀體細胞因子分析：應用RT-PCR的方法，檢測角膜移植術后不同時間角膜植片和虹膜-睫狀體組織內CD80、CD86、IFNγ

3、、IL-2、IL-4和IL-10的表達；(4)角膜植片和虹膜-睫狀體超微結構檢查：應用透射電子顯微鏡觀察正常小鼠以及同種異體角膜移植術后3、7和14天，小鼠角膜和虹膜-睫狀體組織結構的變化，以及炎癥細胞的活化和遷移情況。 結果:A組小鼠術后角膜植片逐漸水腫混濁，新生血管長入，于12天～20天內發(fā)生免疫排斥反應；B組小鼠角膜植片成活時間超過100天。免疫學和組織學檢查發(fā)現(xiàn)：(1)A組小鼠術后第3天，角鞏膜緣和睫狀體基底部開始有少量

4、CD4+T淋巴細胞浸潤，7天時CD4+T淋巴細胞到達角膜植床以及虹膜和前房內，10天時在角膜植片中也能發(fā)現(xiàn)并逐漸增多，免疫排斥反應發(fā)生時達到高峰，此后開始減少；B組小鼠術后早期也有少量CD4+T淋巴細胞浸潤，但拆除角膜縫線后浸潤細胞迅速消失;(2)正常小鼠虹膜-睫狀體中有大量血管，而淋巴管較少；A組小鼠術后虹膜-睫狀體組織內淋巴管逐漸增多，植片排斥時達高峰，明顯多于術前(F=18.078，P=0.000)，而血管變化不明顯(F=0.20

5、4，P=0.892)；B組小鼠術后，虹膜-睫狀體組織內血管和淋巴管均沒有明顯變化(淋巴管：F=2.022，P=0.181；血管：F=0.291，P=0.831);(3)細胞因子分析：A組小鼠術后，角膜植片和虹膜-睫狀體組織內均檢測到CD80和CD86，IL-10僅在排斥的角膜植片中表達，其它細胞因子均為陰性；而B組小鼠未檢測到任何因子表達;(4)透射電子顯微鏡下，小鼠同種異體角膜移植術后，角膜植片、前房和虹膜-睫狀體中逐漸出現(xiàn)炎性細胞浸