促紅細(xì)胞生成素預(yù)防培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的研究.pdf

1、目的：氧化低密度脂蛋白(Oxidized LDL，Ox-LDL)可誘導(dǎo)冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，是否可誘導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells，HUVECs)凋亡尚不清楚。促紅細(xì)胞生成素(Erythropoietin，EPO)可以抑制心肌梗死和缺血再灌注損傷中的心肌細(xì)胞凋亡，能否抑制由Ox-LDL介導(dǎo)的臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞凋亡，也不清楚。本研究擬建立Ox-LDL誘導(dǎo)培養(yǎng)HUVECs凋亡模型

2、，證實(shí)Ox-LDL誘導(dǎo)HUVECs凋亡，以及類凝血素內(nèi)皮型Ox-LDL受體(Lectin-like endothelial ox-LDL receptor，LOX-1)在Ox-LDL誘導(dǎo)HUVECs凋亡過程中的作用，并研究EPO對(duì)Ox-LDL誘導(dǎo)HUVECs凋亡的影響。 方法：體外培養(yǎng)HUVECs，一組細(xì)胞分組孵育24h后加入反式或順式LOX-1mRNA預(yù)處理24h，再加入100μg/ml的Ox-LDL再孵育12h，采用West

3、ern blot檢測(cè)凋亡蛋白Bcl-2/Bax的表達(dá)。另一組細(xì)胞培養(yǎng)24h后加不同濃度(6.25、50、100 IU/ml)重組人促紅細(xì)胞生成素(Recombinant human erythropoietin，rhEPO)預(yù)處理24 h，再加入100μg/ml Ox-LDL孵育，12 h后采用Western blot檢測(cè)凋亡蛋白Bcl-2/Bax的表達(dá)，48 h后流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡率，甲基噻嘩基四唑(MTT)法檢測(cè)細(xì)胞活力。

4、 結(jié)果：0.5μmol/L反式LOX-1 mRNA預(yù)處理細(xì)胞組凋亡蛋白Bcl-2/Bax比值較Ox-LDL組增高(1.72±0.04 VS0.55±0.02，P<0.05)；0.5μmol/L順式LOX-1 mRNA預(yù)處理細(xì)胞組凋亡蛋白Bcl-2/Bax比值較Ox-LDL組對(duì)照無明顯差異(0.59±0.02VS0.55±0.02，P>0.05)。rhEPO預(yù)處理+Ox-LDL組隨rhEPO濃度的遞增細(xì)胞存活率較Ox-LDL對(duì)照組增加(

5、61.23％VS57.24％，63.09％VS57.24％，74.08％VS57.24％，P<0.05，依次)，且與rhEPO呈濃度依賴性(61.23％VS63.09％VS74.08％，P<0.05)；rhEPO預(yù)處理+Ox-LDL組細(xì)胞凋亡率均較Ox-LDL組降低(22.10±2.10％VS35.40±1.30％，13.30±2.30％VS35.40±1.30％，5.70±1.10％VS35.40±1.30％，P<0.05，依次)，且

6、與rhEPO呈濃度依賴性(22.10±2.10％VS13.30±2.30％VS5.70±1.10％，P<0.05)；rhEPO預(yù)處理+Ox-LDL組凋亡蛋白Bcl-2/Bax比值較Ox-LDL組增高(1.53±0.05 VS1.00±0.11，2.86±0.18 VS1.00±0.11，161.45±10.56 VS1.00±0.11，P<0.05，依次)，且與rhEPO呈濃度依賴性(1.53±0.05 VS2.86±0.18 VS16